Clorf35基因沉默對多發(fā)性骨髓瘤ARH-77細(xì)胞生長增殖的初步研究.pdf

1、多發(fā)性骨髓瘤(Multiple myeloma，MM)是一種骨髓內(nèi)漿細(xì)胞異?？寺⌒栽錾碌募膊?，表現(xiàn)為骨髓微環(huán)境中惡性漿細(xì)胞大量積累，同時(shí)產(chǎn)生大量表達(dá)異常的免疫球蛋白。
　　C1orf35基因是本課題組田菁艷用表達(dá)克隆法從ARH-77細(xì)胞基因池中篩選得到的一個與MM惡性相關(guān)的基因，定位于1q42.13，cDNA全長1300 bp，含有8個外顯子，表達(dá)產(chǎn)物約為29 kD，將C1orf35轉(zhuǎn)染至NIH3T3細(xì)胞后，細(xì)胞生長增殖能力顯

2、著增強(qiáng);通過流式細(xì)胞儀檢測出有助于NIH3T3細(xì)胞由G1期向S期轉(zhuǎn)換增多;將C1orf35基因轉(zhuǎn)染至COS-7細(xì)胞后，激光共聚焦技術(shù)顯示該基因編碼的蛋白質(zhì)定位于細(xì)胞核。生物信息學(xué)分析推斷出C1orf35基因可能作為一個轉(zhuǎn)錄因子而發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控的作用。
　　ARH-77屬于人漿細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞株，本研究采用RNAi的方法，以慢病毒GV248/C1orf35 shRNA感染ARH-77細(xì)胞，經(jīng)嘌呤霉素篩選，構(gòu)建出使C1orf35基因表達(dá)下

3、調(diào)的ARH-77/C1orf35-knockdown穩(wěn)定細(xì)胞株。
　　結(jié)果表明，當(dāng)C1orf35基因被干擾后，c-myc基因的表達(dá)也有所下調(diào)，且ARH-77細(xì)胞的增殖能力明顯下降。這說明C1orf35基因與c-myc基因的表達(dá)之間可能有著某種關(guān)聯(lián)，從而協(xié)同引發(fā)MM的致病。Western blotting實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，ARH-77/C1orf35-knockdown細(xì)胞中與細(xì)胞周期從G1到S期轉(zhuǎn)換密切相關(guān)的蛋白Cyclin E和CD