細(xì)胞骨架重排及Rho信號傳導(dǎo)途徑在肝纖維化中的作用機(jī)制研究.pdf

1、肝纖維化是由各種慢性肝病引起的肝臟反復(fù)損傷反應(yīng)的結(jié)果,為適應(yīng)機(jī)體對創(chuàng)傷-修復(fù)反應(yīng)的需求,細(xì)胞外基質(zhì)大量增生,一旦超出了肝臟的降解能力,引起細(xì)胞外基質(zhì)在肝臟內(nèi)的異常沉積,破壞正常肝組織結(jié)構(gòu)將導(dǎo)致肝纖維化的發(fā)生.若不及時治療,病情進(jìn)一步發(fā)展到纖維間隔分割正常肝小葉,形成大小不等的、包裹著增生肝細(xì)胞團(tuán)的假小葉結(jié)構(gòu),將導(dǎo)致肝硬化甚至門靜脈高壓的發(fā)生,從而使治療效果明顯下降,預(yù)后不良.因此,探討肝纖維化的發(fā)病機(jī)制為其治療提供可靠依據(jù)、早期逆轉(zhuǎn)纖維

2、化病情具有重要的臨床價值.研究證實(shí),肝臟的非實(shí)質(zhì)細(xì)胞-肝星狀細(xì)胞是纖維化時產(chǎn)生細(xì)胞外基質(zhì)的主要細(xì)胞,病理狀態(tài)下"靜態(tài)"的星狀細(xì)胞活化轉(zhuǎn)變?yōu)榧〕衫w維母細(xì)胞并合成分泌大量的細(xì)胞外基質(zhì)是肝纖維化發(fā)生發(fā)展的核心環(huán)節(jié),各種細(xì)胞因子和細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑則起著十分重要的作用.該課題擬從星狀細(xì)胞活化的細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)出發(fā),觀察細(xì)胞骨架系統(tǒng)在其中的表達(dá)變化,并探討其內(nèi)在的分子機(jī)制,即研究小G蛋白RhoA信號傳導(dǎo)途徑對細(xì)胞骨架重排的影響.最后設(shè)計(jì)特異性的Rho

3、A反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染肝星狀細(xì)胞株觀察其對膠原合成的抑制效應(yīng),為肝纖維化的基因治療提供新策略.第一部分肝纖維化大鼠肝組織中細(xì)胞骨架重排機(jī)制的初步研究;第一節(jié)肌動蛋白細(xì)胞骨架系統(tǒng)成分在大鼠肝纖維化形成中的表達(dá)變化;目的:通過觀察應(yīng)力纖維、紐蛋白(Vinculin)和粘著斑激酶(FAK)在肝纖維化大鼠肝組織中的表達(dá)變化,初步探討肌動蛋白細(xì)胞骨架系統(tǒng)在肝纖維化發(fā)生中的作用.第二節(jié)細(xì)胞因子RhoA在肝纖維化形成過程中的表達(dá)變化;目的:探討小G蛋白細(xì)

4、胞因子RhoA在肝纖維化大鼠肝組織中的表達(dá)及在纖維化發(fā)生發(fā)展中的作用.第三節(jié)RhoA信號途徑阻斷劑Y27632抑制肝纖維化形成的初步觀察;目的:通過RhoA下游效應(yīng)物ROCK抑制劑Y27632干預(yù),觀察阻斷RhoA信號傳導(dǎo)途徑對肌動蛋白細(xì)胞骨架系統(tǒng)和肝纖維化的影響,探討細(xì)胞骨架重排的內(nèi)在機(jī)制.第二部分細(xì)胞骨架重排對HSC活化的作用機(jī)制;第一節(jié)HSC活化時細(xì)胞骨架成分和RhoA的表達(dá)變化;目的:分離培養(yǎng)肝纖維化大鼠原代HSC,通過檢測紐蛋

5、白、粘著斑激酶和RhoA mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)變化,探討肌動蛋白細(xì)胞骨架成分和RhoA在HSC活化中的作用.第二節(jié)HSC活化時細(xì)胞骨架重排的分子機(jī)制;目的:分離原代肝臟HSC,通過Y27632干預(yù)觀察HSC中RhoA和紐蛋白基因mRNA的表達(dá)以及RhoA和肌球蛋白輕鏈(MLC)蛋白質(zhì)的表達(dá)變化,闡述HSC活化時細(xì)胞骨架重排的內(nèi)在機(jī)制.第三部分RhoA反義寡核苷酸對肝星狀細(xì)胞株HSC-T6膠原表達(dá)的影響;目的:觀察RhoA反義寡核苷酸對