p38MAPK在葛根素、白藜蘆醇促成骨細(xì)胞增殖、分化和抑凋亡中的作用.pdf

1、目的：探討p38MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在17β-雌二醇(17β-E2)、葛根素(PUE)和白藜蘆醇(RES)促成骨細(xì)胞(OB)增殖、分化、抑凋亡中的作用。 方法：1.用酶消化法分離培養(yǎng)新生大鼠顱骨成骨細(xì)胞，觀察細(xì)胞形態(tài)，堿性磷酸酶(ALP)染色和礦化結(jié)節(jié)染色鑒定OB。2.采用第二代細(xì)胞，接種24h后分為對照組(Contro1)；不同濃度(10-8-10-6mol·L-1)的17β-E2、PUE和RES組；含阻斷劑組17β-E2+S

2、B、PUE+SB和RES+SB，先加入SB203580(10μmol·L-1)作用30分鐘預(yù)先阻斷p38MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，再加入上述濃度的17β-E2、PUE和RES，培養(yǎng)72h后用MTT法測定細(xì)胞的增殖能力，PNPP法檢測ALP活性；茜素紅染色計(jì)數(shù)礦化結(jié)節(jié)，測定鈣(Ca)沉積量；反映OB礦化能力。3.細(xì)胞培養(yǎng)8d后采用RT-PCR半定量法測定10-8mol·L-1含與不含阻斷劑的17β-E2、PUE和RES組及對照組的Ⅰ型膠原(C

3、oll Ⅰ)mRNA表達(dá)，反映向OB分化狀況。4.第二代OB，接種24h后換無血清培養(yǎng)并分為對照組，10-8mol·L-1含與不含阻斷劑的17β-E2、PUE和RES組，培養(yǎng)72h后在Annexin V-FITC/PI雙標(biāo)記流式細(xì)胞儀上分析細(xì)胞早期凋亡。 結(jié)果： 1.與對照組相比，17β-E2、PUE和RES各濃度MTT值均顯著增高(P<0.05，P<0.01)，17β-E2+SB、PUE+SB和RES+SB各濃度MTT值仍顯著

4、增高(P<0.05，P<0.01)，與不含SB組相近；2.與對照組相比，17β-E2、PUE和RES各濃度ALP活性顯著增高(P<0.05，P<0.01)，17β-E2+SB、PUE+SB和RES+SB各濃度ALP活性顯著下降(P<0.01)；3.與對照組相比，17β-E2、PUE和RES各濃度礦化結(jié)節(jié)數(shù)目及鈣含量顯著增高(P<0.05，P<0.01)，17β-E2+SB、PUE+SB和RES+SB各組礦化結(jié)節(jié)數(shù)目及鈣含量顯著下降(P<

5、0.01)；4.RT-PCR結(jié)果顯示，與對照組相比，17β-E2、PUE和RES組細(xì)胞的Coll Ⅰ的mRNA表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.05)，含SB各組Coll Ⅰ mRNA表達(dá)明顯受到抑制(P<0.01)；5.流式細(xì)胞儀分析結(jié)果顯示，17β-E2、PUE和RES以及17β-E2+SB、PUE+SB和RES+SB組OB早期凋亡率較對照組明顯降低(P＜0.05)，含SB與不含SB各組相同。 結(jié)論 17β-E2、PUE和RES具有促進(jìn)