藥用真菌豬苓He-Ne激光及紫外線誘變育種的研究.pdf

1、該文以藥用真菌豬苓為研究對象,采用He-Ne激光及紫外線兩種誘變處理對豬苓出發(fā)菌株菌絲體進行了單一誘變劑誘變和復合誘變.通過測量誘變菌落直徑初步確定菌絲生長速率,從各單一誘變劑誘變和復合誘變中均獲得的生長速率不同程度提高的變異菌株.對于初步篩選的變異菌株L3-7、U1-7、LU-7,測量了液體培養(yǎng)條件下的菌絲干重生長曲線、胞外粗多糖的動態(tài)積累、三種與碳素營養(yǎng)相關的酶的活性變化情況,從而進一步篩選出了生長量和胞外粗多糖產(chǎn)量均比出發(fā)菌株有顯

2、著提高的優(yōu)勢變異菌株LU-7.該菌株經(jīng)酯酶同工酶譜分析,酶帶條數(shù)和Rf值均發(fā)生了顯著變化,同時通過傳代穩(wěn)定性試驗分析,都表明該菌株遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且遺傳穩(wěn)定性好.對菌株LU-7的液體培養(yǎng)基進行了優(yōu)化,包括碳源、氮源以及無機元素,還發(fā)現(xiàn)附加一定量的青岡木煮液,能明顯提高菌絲生長速度和胞外多糖積累.同時優(yōu)化了部分優(yōu)勢變異菌株的培養(yǎng)條件.菌株LU-7在經(jīng)篩選的優(yōu)化培養(yǎng)基上生長的最大菌絲體干重為165.5mg/30ml,比在基本培養(yǎng)基上生長的

3、出發(fā)菌株高出了74.9％.LU-7在第11天達到產(chǎn)糖高峰期,為5.42mg/ml,比出發(fā)菌株的2.78mg/ml提高了95.0%.LU-7菌絲發(fā)酵濾液經(jīng)Sevag法除蛋白,減壓濃縮,95%乙醇沉淀,丙酮、乙醚洗滌等步驟獲得了粗品胞外多糖,再經(jīng)葡聚糖凝膠柱層析獲得純品多糖.采用薄層層析和紙層析分析了該菌株與出發(fā)菌株純品多糖酸水解的單糖組成,發(fā)現(xiàn)其單糖組分都是以甘露糖為主.同時還對比了兩者的紅外光圖譜,兩者具有相同的特征吸收峰.說明優(yōu)勢變異