CTN986動(dòng)物體內(nèi)代謝與藥物動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、槲皮素-3-O-β-D-呋喃芹菜糖-(1→2)-[α-L-吡喃鼠李糖-(1→6)]-β-D-吡喃葡萄糖苷，代號(hào)CTN986，是從無毒棉花籽中分離得到的具有抗抑郁活性的黃酮苷類化合物。該化合物對(duì)5HTzA受體有特異性結(jié)合，在小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出良好的抗抑郁活性，是一個(gè)潛在的抗抑郁藥(獲國(guó)家發(fā)明專利，專利號(hào)：ZL99120216．3；已申請(qǐng)美國(guó)發(fā)明專利)。由于測(cè)定方法等方面的限制，黃酮苷的體內(nèi)吸收問題多年來一直是爭(zhēng)論的焦點(diǎn)。CTN986

2、的高極性和強(qiáng)親水性，使得其在體內(nèi)代謝和藥物動(dòng)力學(xué)過程研究對(duì)于現(xiàn)有的分析方法是一種挑戰(zhàn)。本論文目標(biāo)是利用先進(jìn)的分析手段，研究CTN986在動(dòng)物體內(nèi)的代謝和藥物動(dòng)力學(xué)過程，主要工作如下： 一、定量分析方法的建立 建立了測(cè)定動(dòng)物血清、組織、膽汁、尿和糞樣品中CTN986及其次級(jí)苷蘆丁、陸地棉苷和苷元槲皮素的LC／MS／MS分析方法，并應(yīng)用本法對(duì)CTN986在動(dòng)物體內(nèi)的代謝和藥物動(dòng)力學(xué)進(jìn)行了研究。 CTN986、蘆丁和陸

3、地棉苷的檢測(cè)：生物樣品經(jīng)固相萃取后，以甲醇一異丙醇一水一甲酸(20：10：70：0．1，v／v)為流動(dòng)相，采用Zorbaxc8柱分離，電噴霧串聯(lián)四極桿質(zhì)譜檢測(cè)。在正離子條件下通過多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)方式進(jìn)行掃描，分別選取待測(cè)物和內(nèi)標(biāo)的母離子進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜分析，所得碎片離子(CTN986：m／z743．4→303．1，蘆?。簃／z611．2→303．1，陸地棉苷：m／z465．2→303．3和CTN987(內(nèi)標(biāo))：m／z727．3→287．

4、1)的色譜峰面積比用于定量分析。 槲皮素的檢測(cè)：槲皮素和CTN986極性相差較大，因此選擇了有機(jī)溶劑配比更高的流動(dòng)相對(duì)槲皮素進(jìn)行檢測(cè)；另外槲皮素在負(fù)離子條件下的靈敏度高于正離子，因此選擇在負(fù)離子條件下對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)。生物樣品經(jīng)固相萃取后，以乙腈一甲醇一異丙醇一水一甲酸(20：16：8：56：0．08，v／v)為流動(dòng)相，Zorbaxc8柱分離，用于定量分析的離子反應(yīng)為m／z301→151(槲皮素)和m／z725→285(CTN987

5、，內(nèi)標(biāo))。 二、CTN986在小鼠體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)研究 小鼠灌胃和靜脈注射給予CTN986后，在血清中檢測(cè)到CTN986，而未檢測(cè)到其次級(jí)苷和苷元，說明CTN986能夠以原形的形式被吸收入血。靜脈注射給予CTN986后藥物消除半衰期為0．26h，消除較快；灌胃給藥后tmax值為0．5h，ti／2值為1．06h，表明小鼠口服CTN986后吸收迅速，消除也較快；灌胃給藥后CTN986在小鼠體內(nèi)的生物利用度很低(1．91％)。

6、 灌胃給藥后，CTN986在小鼠各主要組織中均有分布，其中以胃壁、腸壁中的藥物濃度最高，各組織中藥物消除較快，給藥后3．5h幾乎完全消除，表明該藥物經(jīng)口服給藥后不易在體內(nèi)產(chǎn)生蓄積。 三、CTN986在大鼠體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)研究 大鼠灌胃和靜脈注射給予CTN986后，在血清中檢測(cè)到CTN986，而未檢測(cè)到其次級(jí)苷和苷元。大鼠靜脈注射給藥后CTN986消除半衰期為0．23h，灌胃給藥后藥物消除半衰期為1．18h，藥物消

7、除較快；在大鼠體內(nèi)的生物利用度很低(1．33％)。研究結(jié)果顯示，CTN986在大鼠與小鼠體內(nèi)的吸收動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)相類似，即吸收和消除均較快，絕對(duì)生物利用度很低。 大鼠靜脈給予2．5mg／kgCTN986后48h，膽汁中CTN986累積排泄量為5．45±138μg，占給藥劑量0．95±O．34％；給藥后120h尿中CTN986累積排泄量為4．35±0．25μg，占給藥劑量1．08±O．08％；靜脈給藥后糞中未檢測(cè)到CTN986。

8、 大鼠灌胃給予90mg／kgCTN986后22h，膽汁中CTN986累積排泄量個(gè)體差異較大，為17．34±18．53μg，占給藥劑量0．¨9土0．139％；給藥后48h尿中CTN986累積排泄量很低，為0．21士0．07μg，占給藥劑量0．013±0．004％0；給藥后24h糞中CTN986累積排泄量個(gè)體差異也很大，為17．97±19．45μg，占給藥劑量O．114±O．123％。 上述結(jié)果表明CTN986靜脈給藥后主要經(jīng)尿和

9、膽汁排泄；口服給藥后主要經(jīng)膽汁和糞排泄，尿中累積排泄量很低。 四、CTN986在鼠體內(nèi)的代謝研究 脫糖代謝是糖苷類化合物常見的代謝途徑。本研究結(jié)果顯示，大鼠和小鼠靜脈注射或灌胃給予CTN986后，在血清、膽汁、尿和糞樣中均未檢測(cè)到其次級(jí)苷和苷元，沒有發(fā)現(xiàn)CTN986在大鼠和小鼠體內(nèi)的脫糖代謝情況。用β-葡萄糖苷酸水解酶和硫酸水解酶水解上述生物樣品后，仍然沒有檢測(cè)到其次級(jí)苷和苷元，CTN986的含量也未見提高，表明鼠體內(nèi)沒

10、有產(chǎn)生上述化合物的結(jié)合型代謝產(chǎn)物：葡萄糖苷酸結(jié)合物或硫酸結(jié)合物。而在大鼠和小鼠體內(nèi)均發(fā)現(xiàn)了CTN986的一個(gè)主要代謝產(chǎn)物，即甲基化代謝物M1。對(duì)生物樣品中M1進(jìn)行半定量分析，發(fā)現(xiàn)其在組織樣品和排泄樣品中的含量均較高。 小鼠灌胃給予CTN986(80mg／kg劑量)后，M1在各主要組織中均有分布，其中以腸壁中M1的濃度最高；脾中M1濃度較高，腦和腎中M1濃度較低。與原形CTN986相比，M1在脾中的分布明顯高于CTN986，在小鼠

11、體內(nèi)的消除較CTN986緩慢。 大鼠靜脈給予2．5mg／kgCTN986后48h，膽汁中M1累積排泄量為97．95士27．10μg，占給藥劑量17．03土4．71％，約為原形CTN986累積排泄量的20倍；靜脈給藥后120h尿中M1累積排泄量為6．65±1．48μg，占給藥劑量1．65±0．39％，略高于原形藥物的累積排泄量；靜脈給藥后糞中未檢測(cè)到M1。上述結(jié)果表明靜脈給予CTN986后以代謝產(chǎn)物M1的形式從膽汁中排出是其主要的