PPARα生物活性改變?cè)谒ダ蟽?nèi)皮細(xì)胞功能失調(diào)的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的： 過氧化物酶體增殖物激活受體α(peroxisomeproliferatorsactivatedreceptorsα,PPARα)是核受體超家族中的一類配體依賴的核轉(zhuǎn)錄因子，在脂肪細(xì)胞分化、能量代謝、炎癥過程中都發(fā)揮重要作用。最近研究顯示，PPARα作為NF-kB、AP-1等炎癥轉(zhuǎn)錄因子的重要上游調(diào)控基因，具有強(qiáng)大的抗炎癥、抗動(dòng)脈粥樣硬化功能，在維護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞功能上具有重要意義。動(dòng)脈粥樣硬化是內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙后繼發(fā)性炎癥病變

2、不斷演進(jìn)的疾病，而且目前大量實(shí)驗(yàn)提示，衰老內(nèi)皮細(xì)胞的功能失調(diào)是促發(fā)老年動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的重要病理基礎(chǔ)。據(jù)此，本課題致力于明確衰老相關(guān)的內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙是否與內(nèi)皮細(xì)胞PPARα的生物學(xué)活性狀態(tài)變化密切相關(guān)，以期揭示衰老內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生功能失調(diào)的病生機(jī)制，探索老年人動(dòng)脈粥樣硬化病變發(fā)生發(fā)展的的病理生理機(jī)制，為尋求防治老年動(dòng)脈粥樣硬化的有效措施提供理論依據(jù)。 方法： 體外原代培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，傳代至衰老，應(yīng)用β-半乳糖苷酶

3、染色法及流式細(xì)胞儀法觀察細(xì)胞分裂能力，以二者為標(biāo)準(zhǔn)確定內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)入衰老狀態(tài)，以此分為青年組及衰老組人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞；硝酸還原酶法檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞NO合成水平，電泳遷移率變動(dòng)分析法(EMSA)檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞NF-kB、AP-1、PPARα的轉(zhuǎn)錄活性；半定量逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng)(sqRT-PCR)檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞PPARα、RXRα、NCoR的mRNA表達(dá)水平；細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞泛素表達(dá)水平；應(yīng)用sqRT-PCR、EMSA方法分別檢測(cè)老年組臍

4、靜脈內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)不同濃度PPARα特異性活化劑CS207處理后PPARαmRNA表達(dá)水平及其DNA結(jié)合活性。 結(jié)果： 體外原代培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，傳代至第六代即進(jìn)入衰老狀態(tài)，表現(xiàn)為β-半乳糖苷酶染色陽性，80％的細(xì)胞滯留在G0-G1期，S期細(xì)胞近于消失；內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)入衰老階段后，自身功能發(fā)生失調(diào)，NO合成水平顯著下降，NF-kB、AP-1轉(zhuǎn)錄活性顯著增強(qiáng)；與青年組內(nèi)皮細(xì)胞比較，衰老組內(nèi)皮細(xì)胞PPARα的mRNA表達(dá)及DN

5、A結(jié)合活性均顯著降低，RXRαmRNA表達(dá)無明顯差異，而NCoRmRNA表達(dá)顯著增強(qiáng)，細(xì)胞內(nèi)泛素蛋白表達(dá)顯著增強(qiáng)；PPARα特異性活化劑CS207能夠有效逆轉(zhuǎn)衰老人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞PPARαmRNA表達(dá)及DNA結(jié)合活性的降低，此效應(yīng)呈現(xiàn)濃度依賴性。 結(jié)論： 衰老相關(guān)的內(nèi)皮細(xì)胞自身功能障礙與衰老內(nèi)皮細(xì)胞PPARα的生物學(xué)活性下降密切相關(guān)，PPARα特異性活化劑CS207能夠有效逆轉(zhuǎn)此現(xiàn)象，是預(yù)防內(nèi)皮細(xì)胞衰老時(shí)自身功能失調(diào)的有