EGb761對(duì)慢性低氧低糖培養(yǎng)小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞RAGE、LRP-1表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景：阿爾茲海默病(Alzheimer's Disease,AD)是老年人最常見(jiàn)的癡呆類(lèi)型,嚴(yán)重危害老年人健康,但發(fā)病機(jī)制未明。AD的主要病理特征是p.淀粉樣蛋白(β-amyloid protein,Aβ)在腦內(nèi)聚集為老年斑(senile plaques,SPs),對(duì)占AD絕大部分的散發(fā)性AD(sporadic Alzheimer disease,SAD)的病因?qū)W研究發(fā)現(xiàn),Aβ清除減少是其腦內(nèi)Aβ聚集的主要原因。血腦屏障(blood

2、-brain barrier,BBB)是大腦清除Aβ的重要途徑,存在于BBB上的晚期糖基化終產(chǎn)物受體(receptor for advancedglycation end products,RAGE)和低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白-1(LDL receptor relatedprotein-1,LRP-1)是一對(duì)作用方向相反的使Aβ穿梭于血腦之間的轉(zhuǎn)運(yùn)體,即大腦對(duì)Aβ清除能力取決于兩轉(zhuǎn)運(yùn)體運(yùn)載Aβ量的代數(shù)和。大量研究表明腦缺血,尤其是老年人

3、普遍存在的腦慢性低灌注與散發(fā)性AD強(qiáng)烈關(guān)聯(lián),可以導(dǎo)致Aβ增加,但具體機(jī)制仍不清楚。Egb761是中醫(yī)傳統(tǒng)的腦缺血保護(hù)劑是常用的缺血腦保護(hù)中藥,目前常被用作治療AD。因此研究慢性腦缺血對(duì)BBB上RAGE、LRP-1表達(dá)的影響對(duì)于明確Aβ增加的機(jī)制以及進(jìn)一步探討AD的病因有重要的意義。 目的：1.探討慢性缺血對(duì)BBB上RAGE、LRP-1表達(dá)的影響。2.通過(guò)研究Egb761對(duì)慢性缺血BBB上RAGE,LRP-1的影響探討Egb761

4、治療癡呆的可能機(jī)制。 方法：將腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞系bEnd.3予低氧低糖或/和Egb761(100ug/ml)干預(yù)24h、36h、48h,MTT法檢測(cè)低氧低糖或/和Egb761對(duì)腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞活力的影響,RT-PCR測(cè)定RAGE、LRP-1mRNA的表達(dá),Western blot檢測(cè)RAGE,LRP-1蛋白表達(dá)。 結(jié)果：1.Egb761對(duì)慢性低氧低糖培養(yǎng)bEnd.3細(xì)胞活力的影響:MTT的結(jié)果表明低氧低糖培養(yǎng)24h、36

5、h、48h組較正常培養(yǎng)對(duì)照組細(xì)胞活力降低,具有顯著性差異(P<0.05),Egb761對(duì)低氧低糖培養(yǎng)bend.3細(xì)胞具有保護(hù)作用。2.Egb761對(duì)慢性低氧低糖培養(yǎng)bEnd.3細(xì)胞RAGE、LRP-1mRNA水平表達(dá)的影響：低氧低糖培養(yǎng)24h、36h、48h后,bEnd.3細(xì)胞RAGEmRNA表達(dá)高于正常培養(yǎng)對(duì)照組,分別為正常培養(yǎng)對(duì)照組的1.56、1.62和1.98倍(P<0.05),低氧低糖培養(yǎng)36h、48h后,bEnd.3細(xì)胞LRP

6、-1mRNA表達(dá)下調(diào),分別為正常培養(yǎng)對(duì)照組的0.78和0.6倍(P<0.05)。而Egb761干預(yù)低氧低糖培養(yǎng)組與低氧低糖培養(yǎng)組相比,三個(gè)時(shí)段bEnd.3細(xì)胞RAGEmRNA表達(dá)均降低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而LRP-1mRNA表達(dá)與低氧低糖培養(yǎng)組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。3.Egb761對(duì)慢性低氧低糖培養(yǎng)bEnd.3細(xì)胞RAGE、LRP-1蛋白水平表達(dá)的影響：低氧低糖培養(yǎng)24h、36h、48h后RAGE蛋白表達(dá)呈時(shí)間

7、依賴(lài)性增加(P<0.05),48h組升為正常培養(yǎng)對(duì)照組的1.7倍,三時(shí)間點(diǎn)LRP-1蛋白的表達(dá)呈時(shí)間依賴(lài)性降低,48h組低至正常培養(yǎng)對(duì)照組的20％(P<0.05),而Egb761干預(yù)低氧低糖培養(yǎng)組與低氧低糖培養(yǎng)組相比,三個(gè)時(shí)段bEnd.3細(xì)胞RAGE蛋白表達(dá)均降低,而24h、36h LRP-1蛋白表達(dá)增加,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論：1.慢性低氧低糖培養(yǎng)降低bEnd.3細(xì)胞活力,而Egb761對(duì)慢性低氧低糖培養(yǎng)ben