吲哚乙酸與辣根過氧化物酶聯(lián)合作用于人舌鱗癌Tca-8113細胞株的實驗研究.pdf

1、目前,我國口腔頜面部的癌瘤中以鱗狀細胞癌(簡稱鱗癌)最為多見,約占80％以上,男性多于女性。而舌鱗癌是其中最常見者,尤其在舌前2/3部位。舌癌多發(fā)生于舌緣,其次為舌尖、舌背及舌根等處,常為潰瘍型或浸潤型。一般惡性程度較高,生長快,浸潤性較強,常波及舌肌,致使舌運動受限,使說話、進食及吞咽均發(fā)生困難。由于舌體具有豐富的淋巴管和血液循環(huán),并且舌的機械運動頻繁,因此舌癌淋巴轉移較早且轉移幾率較高。舌癌還可發(fā)生遠處轉移,一般多轉移至肺部,嚴重危

2、害患者的生命及生活質量。目前對于舌鱗癌的治療是以手術為主的綜合治療,雖然這些年取得了較大的進展,但是其臨床治療中仍有許多疑點,轉移復發(fā)率依然較高,病人的身心承受著莫大的痛苦。因此,尋找新的低毒高效的抗腫瘤藥物,仍是醫(yī)務工作者為之奮斗的目標。植物激素是植物體內合成的對植物生長發(fā)育有顯著作用的幾類微量有機物質,也被稱為植物天然激素或植物內源激素。它們都是些簡單的小分子有機化合物,但其生理效應卻非常復雜、多樣。植物激素對植物的生長發(fā)育有重要的

3、調節(jié)控制作用?，F(xiàn)在,已有越來越多的報道稱將植物激素應用于腫瘤領域的研究并取得了顯著的成績。吲哚乙酸(Indole-3-acetic Acid,IAA)是一種植物生長激素,在植物細胞分裂、生長、分化過程中起到了關鍵的作用。辣根過氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)是一種含有激素的植物過氧化物酶,它可氧化包括吲哚乙酸在內的一系列底物。目前的一些研究表明,IAA在人體內有很高的耐受性,不易被哺乳類過氧化物酶氧化,只

4、有在辣根過氧化物酶存在時才會使IAA氧化而產生有毒的代謝產物,對腫瘤單獨發(fā)生毒性作用,不會損害正常組織。國外學者在研究IAA/HRP的共同作用時,IAA的作用濃度取值不同,但HRP的濃度一定,提示IAA作用可能存在一定的濃度效應。而當IAA和HRP以二者聯(lián)合作用時的相同濃度單獨作用時,則不會產生任何毒性效應。為了探討IAA和HRP對舌鱗癌細胞株Tca-8113的作用,我們將IAA和HRP聯(lián)合作用于Tca-8113細胞,觀察Tca-811

5、3細胞在用藥前后的改變情況,希望能夠了解該植物激素對舌鱗癌的作用及其機制,為治療舌鱗癌的臨床應用提供理論依據,同時針對IAA/HRP抗腫瘤的特點,加強其聯(lián)合用藥的研究,充分發(fā)揮其獨特效用,為臨床治療腫瘤提供新的思路。
　　目的:觀察IAA/HRP作用于體外培養(yǎng)的Tca-8113細胞后,對其細胞增殖、細胞周期及凋亡的影響,及其與時間、濃度、劑量的相關性,為其治療舌鱗癌提供實驗依據和理論基礎。
　　材料與方法:1、Tca-811

6、3細胞株由上海第二醫(yī)科大學口腔醫(yī)學院提供。2、IAA和HRP購自鄭州創(chuàng)生生物工程有限公司。3、倒置顯微鏡觀察IAA/HRP作用于細胞后細胞的生長狀態(tài)及形態(tài)學改變。4、采用MTT檢測各組細胞的增殖抑制率。實驗分組:設對照組和實驗組,對照組只加細胞,實驗組按照IAA的濃度分別為20、40、60、80、100μmol/l五組,每組HRP的濃度均為1.2mg/l。測其作用于Tca-8113細胞24h、48h、72h、96h后的OD值,并計算各組

7、細胞的增殖抑制率。5、采用流式細胞儀檢測蛋白周期的改變。6、采用免疫細胞化學方法檢測IAA/HRP對Tca-8113細胞Bcl-2蛋白表達的改變。
　　結果:1.IAA/HRP對Tca-8113細胞增殖的影響與對照組相比,除20μmol/l組無統(tǒng)計學意義(P=0.158>0.05)外,40μmol/l濃度以上的IAA與HRP結合均可抑制Tca-8113細胞的增殖,隨著濃度的增加,細胞增殖能力下降;且隨著時間的增加,其增殖能力也下降

8、,其差別均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),說明IAA/HRP對Tca-8113的抑制作用具有時間和濃度依賴性。2.細胞周期分析Tca-8113細胞在IAA/HRP作用48h時,隨著IAA藥物濃度的增大,流式細胞儀檢測示G1期細胞百分比呈上升趨勢,G2期和S期細胞百分比均呈下降趨勢,其差別均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。3.免疫細胞化學結果分析免疫細胞化學檢測結果顯示:除對照組與濃度為20μmol/l(P=0.930>0.05)和40μm

9、ol/l(P=0.073>0.05)之間無統(tǒng)計學意義外,對照組和濃度為60μmol/l、80μmol/l、100μmol/l組的測量值均存在顯著差異(P<0.001),而且隨著IAA濃度的增加,Bcl-2的值下降明顯,說明IAA對Tca-8113細胞的抑制具有濃度依賴性。從24小時到72小時其值呈下降趨勢,且存在顯著差異(P<0.001),說明IAA/HRP對Tca-8113細胞的抑制具有時間依賴性。
　　結論:1.IAA/HRP

10、能抑制Tca-8113細胞的增殖,其增殖抑制作用與時間和濃度呈正相關。2.流式細胞儀結果顯示G1期細胞的百分比隨著濃度的增加而逐漸增加,S期和G2期的比值降低,且均具有統(tǒng)計學意義。因此,由IAA/HRP引起的細胞周期阻滯是Tca-8113細胞生長抑制的另一個重要的原因。3.IAA/HRP能夠抑制Bcl-2的表達,從而促進Tea-8113細胞的凋亡。4.本試驗結果表明60μmol/l以上的藥物組在各處理時間點上對Tca-8113均具有抑制