FOXP3△2相互作用分子的篩選與鑒定.pdf

1、CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞（Tregs）是在機體整個免疫網(wǎng)絡(luò)的負調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用的一種CD4+T淋巴細胞亞群，在維持機體免疫自穩(wěn)和防止自身免疫性疾病中發(fā)揮重要作用。叉狀頭轉(zhuǎn)錄因子Foxp3是誘導(dǎo)CD4+CD25+Tregs細胞發(fā)育及生物學(xué)功能發(fā)揮的主調(diào)控因子，具有下調(diào)免疫應(yīng)答的功能。Foxp3基因突變或缺失會導(dǎo)致嚴重的自身免疫性疾病。鼠Foxp3突變導(dǎo)致Xsf/Y雄性雜合子小鼠發(fā)生進行性自身免疫缺陷病，表現(xiàn)為器官非特異性淋巴細胞浸

2、潤及多種細胞因子的大量分泌，從而導(dǎo)致Xsf/Y雄性雜合子小鼠多數(shù)在出生后16－25天內(nèi)死亡。人類同源的Foxp3功能性突變可導(dǎo)致人類一種免疫調(diào)節(jié)紊亂的X連鎖綜合征(immune dysregulation polyendocrinopathy enteropathy X-linked syndrome,IPEX)，表現(xiàn)為免疫失調(diào)、多種內(nèi)分泌腺病、腸病、X染色體性聯(lián)綜合征。因此，F(xiàn)oxp3在免疫系統(tǒng)的負調(diào)節(jié)中發(fā)揮非常重要的作用。
　

3、　Foxp3的兩個亞型（Foxp3FL和Foxp3△2）在人CD4+CD25+Tregs中均有表達，并且它們都具有賦予CD4+CD25-T細胞轉(zhuǎn)化為CD4+CD25+Tregs的活性，但是目前關(guān)于Foxp3的作用機制尚未闡明。大量研究顯示，F(xiàn)oxp3作為轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，并不直接調(diào)控下游靶基因，而是與其它一些轉(zhuǎn)錄因子或酶分子形成―動態(tài)超分子復(fù)合物‖共同發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能。目前已知的Foxp3相互作用分子有NFAT、NF-кB、AML1/Run

4、x1、AP-1、RORγt和TIP60，其中，在我們課題的進行中，陸續(xù)有文獻報道Foxp3與AP-1、AML1/Runx1、RORγt和TIP60的相互作用。但是僅僅針對這些分子的研究并不能充分闡明Foxp3的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制，所以對未知的Foxp3相互作用分子的進一步探討是Foxp3轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究的熱點。
　　本課題是以Foxp3△2亞型作為誘餌，從外周血白細胞cDNA文庫篩選可以與其相互作用的分子。最終我們獲得40個陽性克隆，經(jīng)DN

5、A測序和Blast核苷酸相似性分析發(fā)現(xiàn)這40個陽性克隆所編碼的蛋白質(zhì)在Gal4DNA激活域開放讀框內(nèi)的共9個。在這9個Foxp3△2候選相互作用分子中，我們重點對泛表達轉(zhuǎn)錄子（ubiquitously-expressed transcript，UXT）與Foxp3△2的相互作用進行研究。通過酵母雙雜交回交驗證和免疫共沉淀證實了Foxp3△2與UXT在酵母細胞和哺乳動物細胞內(nèi)均存在相互作用，并且激光共聚焦掃描結(jié)果顯示Foxp3△2和UXT

6、共定位于細胞核，進一步為二者的相互作用提供了理論基礎(chǔ)。為了明確Foxp3△2與UXT的作用部位，我們構(gòu)建了Foxp3△2分子的5個截短體，并通過酵母雙雜交中的β-半乳糖苷酶實驗發(fā)現(xiàn)Foxp3△2的脯氨酸富含域?qū)Χ叩南嗷プ饔檬潜夭豢缮俚摹?br>　　此外，我們對Foxp3和UXT相互作用的功能進行了初步的探討。最近研究顯示，F(xiàn)oxp3不但表達于淋巴細胞，還表達于多種腫瘤細胞，表達于腫瘤細胞的Foxp3可能參與了腫瘤的免疫逃逸。我們課題組