RNAi沉默APE1-Ref-1增強(qiáng)吉西他濱對胰腺癌細(xì)胞SW1990化療敏感性的體內(nèi)外研究.pdf

1、上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文RNAi沉默APE1Ref1增強(qiáng)吉西他濱對胰腺癌細(xì)胞SW1990化療敏感性的體內(nèi)外研究姓名：孫慧玲申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)（消化內(nèi)科）指導(dǎo)教師：吳叔明20090401上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院2009屆碩士學(xué)位中文摘要V采用流式細(xì)胞術(shù)和Hochest33258染色檢測其誘導(dǎo)SW1990細(xì)胞凋亡及對化療的増敏作用；2.構(gòu)建靶向APE1Ref1的慢病毒載體，并建立裸鼠皮下胰腺癌移植瘤模型，用攜帶APE1Ref1基因的慢

2、病毒上清瘤內(nèi)注射和吉西他濱腹腔內(nèi)注射聯(lián)合治療，觀察裸鼠腫瘤生長情況，繪制腫瘤生長曲線，計(jì)算抑瘤率，并用免疫組織化學(xué)方法檢測腫瘤組織APE1Ref1蛋白表達(dá)情況?！窘Y(jié)果】體外實(shí)驗(yàn)中，RNA干擾APE1Ref1基因能夠降低mRNA和蛋白的表達(dá)，對蛋白的抑制率為（55.413.58）%，可抑制SW1990細(xì)胞增殖，干擾24h、48h和72h抑制率分別為（41.692.78）%、（24.833.70）%、（21.279.82）%；流式檢測測細(xì)胞

3、凋亡，較對照組，吉西他濱組、siAPE1組和聯(lián)合組均可見明顯凋亡的凋亡，早期凋亡率分別為（2.731.41）%、（7.71.14）%、（8.370.98）%、（19.83.47）%，Hochest染色可見聯(lián)合組有明顯的凋亡核形態(tài)學(xué)變化。體內(nèi)試驗(yàn)中，慢病毒載體介導(dǎo)的RNA干擾沉默APE1Ref1基因，聯(lián)合治療組和對照組、吉西他濱組、RNA干擾單用組腫瘤大小間存在明顯差異，與對照組相比，RNA干擾組、吉西他濱組、聯(lián)合組抑瘤率分別為22.56

4、%、50.91%、66.37%，免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾能夠成功沉默APE1Ref1基因?！窘Y(jié)論】1.RNA干擾沉默APE1Ref1基因能夠在體內(nèi)外抑制胰腺癌SW1990的生長2.慢病毒載體pGCLGFPU6APE1siRNA可特異性地沉默胰腺癌SW1990細(xì)胞表達(dá)；3.RNA干擾沉默APE1Ref1基因能夠增強(qiáng)吉西他濱對胰腺癌的化療作用；4.慢病毒與吉西他濱聯(lián)合治療胰腺癌，可以作為腫瘤基因治療的載體。關(guān)鍵詞：胰腺癌；AP