芩丹膠囊對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血管外膜Ⅰ、Ⅲ膠原表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　 1．觀察芩丹膠囊對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠血壓的影響。
　　 2．觀察芩丹膠囊對(duì)血管外膜Ⅰ、Ⅲ膠原表達(dá)的影響，并探討芩丹膠囊逆轉(zhuǎn)高血壓血管外膜重構(gòu)的機(jī)制。
　　 方法：
　　 1．研究對(duì)象：32只40周齡雄性SHR大鼠隨機(jī)分為4組，模型組（SHR組）、芩丹膠囊大劑量組（SHR+QDH組）、芩丹膠囊小劑量組（SHR+QDL組）、氯沙坦組（SHR+Los組），另設(shè)40周齡雄性WKY大鼠16只分為空白對(duì)照

2、組(WKY空白組)及正常藥物對(duì)照組（WKY+QD組）。SHR+QDH組給予芩丹膠囊750mg/(kg·d):SHR+QDL組給予芩丹膠囊150mg/(kg·d);SHR+Los組給予氯沙坦30mg/(kg·d):WKY+QD組給予芩丹膠囊750mg/(kg·d);WKY空白組和SHR組給予相等劑量生理鹽水，1次/d，連續(xù)給藥12周。各組大鼠在末次給藥后禁食24h，不禁水。10％水合氯醛腹腔注射麻醉后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
　　 2．研究

3、內(nèi)容：(1)大鼠尾動(dòng)脈收縮壓測(cè)定。(2)免疫組化法觀察胸主動(dòng)脈外膜Ⅰ、Ⅲ膠原表達(dá)。(3)實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)胸主動(dòng)脈外膜Ⅰ、Ⅲ膠原表達(dá)。(4)用western blotting檢測(cè)Ⅰ膠原蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1．各組大鼠治療前后收縮壓比較
　　 見圖1，從給藥第4周起，SHR+QDH組、SHR+QDL組、SHR+Los組分別與SHR組比較，血壓下降明顯，其差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。給藥6周到1

4、2周間，SHR+QDH組比SHR+QDL組血壓下降更為顯著，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2．胸主動(dòng)脈組織免疫組織化學(xué)測(cè)定
　　 結(jié)果顯示，見表2，圖2、3，SHR組與WKY空白組比較，Ⅰ、Ⅲ膠原表達(dá)明顯增多，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；SHR+QDH組、SHR+QDL組及SHR+Los組表達(dá)較SHR組均減少（P＜0.05）。WKY空白組與WKY+QD組Ⅰ、Ⅲ膠原表達(dá)量比較，其差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞

5、0.05），SHR+QDH組與SHR+QDL組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但與SHR+Los組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 3．主動(dòng)脈壁Ⅰ、Ⅲ膠原mRNA表達(dá)水平比較
　　 采用2-△△Ct方法，將Ⅰ、Ⅲ型膠原基因表達(dá)Ct值轉(zhuǎn)換為相對(duì)于WKY空白組的變化倍數(shù)，可以直接得到的目的基因相對(duì)于參照基因的定量。如圖6和7所示分別為Ⅰ、Ⅲ膠原的擴(kuò)增、溶解曲線和溶解峰，說(shuō)明Ⅰ、Ⅲ膠原是特異性基因表達(dá)，無(wú)引

6、物二聚體及非特異性擴(kuò)增。研究結(jié)果顯示：見圖4，WKY空白組和WKY+QD組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，SHR+QDH組和SHR+QDL組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。SHR組大鼠胸主動(dòng)脈壁Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)量與WKY組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。SHR+QDH組、SHR+QDL組及SHR+Los組大鼠胸主動(dòng)脈壁Ⅰ、Ⅲ型膠原表達(dá)與WKY組大鼠相比明顯增多，與SHR組相比有所減少，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.

7、05）。
　　 4．Ⅰ膠原在免疫印跡中的蛋白表達(dá)
　　 WKY空白組，WKY+QD組，SHR+Los組，SHR+QDH組，SHR+QDL組，SHR組蛋白表達(dá)依次增強(qiáng)，Ⅰ型膠原分子量大小在120KD左右，參照actin，分子量為43KD，可看出蛋白表達(dá)依次增強(qiáng)的趨勢(shì)。見圖5，用Ⅰ型膠原與actin的比值做統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示：WKY空白組和WKY+QD組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），SHR+QDH組和SHR+QDL組間差

8、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。SHR模型組和正常WKY相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；SHR+QDH組、SHR+QDL組、SHR+Los組分別與SHR組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；SHR+QDH組與SHR+Los組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 芩丹膠囊對(duì)SHR大鼠有顯著的降壓療效，其降壓機(jī)制與芩丹膠囊降低SHR大鼠Ⅰ、Ⅲ膠原表達(dá)水平有關(guān)，同時(shí)與逆轉(zhuǎn)血管外膜重構(gòu)，抑制外