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文檔簡介
1、目的:特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)是一種免疫介導(dǎo)的血小板減少綜合征,是兒童最為常見的出血性疾病。目前對ITP的診斷依然是“排除診斷法”,臨床上診斷主要靠外周血小板減少但其無特異性;抗血小板抗體測定對診斷ITP的意義基本上是負(fù)性的;骨髓檢查創(chuàng)傷性大,患兒及其家屬不易接受,因此需尋求一種能為ITP的患兒的臨床病情早期診斷,預(yù)后估計,制定個體性的治療方案提供依據(jù)的診斷方法。用表面增強(qiáng)激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(surface enhance
2、d laser desorPTIon/IonIzaTIon—TIme of flIghT—mass sPecTromeTry,SELDI— TOF— MS)技術(shù)結(jié)合蛋白芯片檢測特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)(治療前)、特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)(治療后)非免疫性血小板減少癥(NITP)和正常對照組血小板蛋白質(zhì)譜的差異性表達(dá),篩選可用于特發(fā)性血小板減小性紫癜早期診斷及病情變化監(jiān)測及判斷預(yù)后的血小板蛋白質(zhì)標(biāo)志物,建立ITP診斷模型,
3、并用ROC曲線判斷其靈敏度和特異度,在血小板蛋白質(zhì)組水平創(chuàng)立特發(fā)性血小板減小性紫癜的分子診斷新方法。方法:應(yīng)用SELDI-TOF-MS檢測結(jié)合在蛋白質(zhì)芯片上的血小板蛋白質(zhì),獲得30例ITP治療前,30例ITP治療后,30例NITP和40例正常對照者的血小板蛋白表達(dá)指紋圖譜,并用BIomarker WIzard和BIomarkerPaTerns SysTem5。0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,建立人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)診斷模型,并用ROC曲線判斷其靈敏度和特
4、異度。結(jié)果:在分子質(zhì)量/電荷比值(質(zhì)荷比,mass elecTron raTIo,M/Z)為2000-20000范圍內(nèi), ITP治療前組與正常對照組之間有顯著差異(P<0.01)的蛋白質(zhì)峰有27個,其中高表達(dá)的蛋白質(zhì)峰有2個,低表達(dá)的蛋白質(zhì)峰有25個,從分析的結(jié)果看最有意義的蛋白質(zhì)是差異最顯著及P值最小(為O)的蛋白質(zhì)有四種,質(zhì)荷比分別為3130.18、2281.72、7672.06、5170.65的蛋白質(zhì)。這些蛋白可能為ITP的生物標(biāo)
5、記物,其中M/Z是2281.72的蛋白未發(fā)現(xiàn)對應(yīng)蛋白質(zhì),可能為新的蛋白質(zhì),余三種蛋白可能為β-防衛(wèi)素110、50S核糖體蛋白質(zhì)L34和60S核糖體蛋白L41。ITP治療前組與 ITP治療后組有顯著差異(P<0.01)的蛋白質(zhì)峰有25個,均為低表達(dá),其中有5個蛋白亦包含在ITP治療前與正常對照組中.從分析的結(jié)果看最有意義的蛋白質(zhì)是差異最顯著及P值最小(為O)的蛋白質(zhì)是質(zhì)荷比為2574.16、6218.23、3126.14、4718.90的
6、蛋白質(zhì)。其中M/Z是6218的蛋白未發(fā)現(xiàn)對應(yīng)蛋白質(zhì),可能為新的蛋白質(zhì),余三種蛋白可能為尿激酶型纖維蛋白酶原激活劑、多肽菌素-C和細(xì)胞色素 b559β亞基.它們可以看成是 ITP的血小板標(biāo)志物。ITP治療后與正常對照組之間有顯著差異(P<0.01)的蛋白質(zhì)峰有10個,其中高表達(dá)的蛋白質(zhì)峰有3個,低表達(dá)的蛋白質(zhì)峰有7個;其中有2個蛋白亦包含于ITP治療前組與ITP治療后組,從分析的結(jié)果看最有意義的蛋白質(zhì)是差異最顯著及P值最小(為 O)的蛋白
7、質(zhì)是質(zhì)荷比為2350.85、3549.49、2572.70、4451.54、2205.75的蛋白質(zhì)。其中M/Z是2350的蛋白未發(fā)現(xiàn)對應(yīng)蛋白質(zhì),可能為新的蛋白質(zhì),余蛋白質(zhì)可能為芋螺毒素ArMSGL-0123、毒魚豆素-1、UrocorTIn-2和前腦啡肽-A.它們可能是其ITP的血小板生物標(biāo)志物;ITP治療前組與NITP組之間有顯著差異(P<0.01)的蛋白質(zhì)峰有22個,均為低表達(dá)的蛋白質(zhì)峰;從分析的結(jié)果看最有意義的蛋白質(zhì)是差異最顯著及
8、P值最小(為O)的蛋白質(zhì)是質(zhì)荷比為2281.72、2854.65、3813.62、4061.78的蛋白質(zhì)。其中M/Z是2281的蛋白未發(fā)現(xiàn)對應(yīng)蛋白質(zhì),可能為新的蛋白質(zhì)。余蛋白質(zhì)可能為天冬氨酸1-脫羧酶β鏈、β內(nèi)啡肽和磷脂酰絲氨酸脫羧酶α鏈。它們亦可能為ITP的血小板生物標(biāo)志物;質(zhì)荷比為3130.18、2281.72、7672.06、5170.65的蛋白質(zhì)組合的診斷模型繪制出的R O C曲線,其面積為0.968,最佳閾值為0.3807,靈
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