洛伐他汀及巴曲酶治療膠原誘導(dǎo)性大鼠關(guān)節(jié)炎的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分洛伐他汀對(duì)大鼠膠原性關(guān)節(jié)炎的治療作用及免疫學(xué)機(jī)制。
　　 目的：本研究以膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(CIA)大鼠為模型，評(píng)價(jià)洛伐他汀對(duì)CIA的抗炎療效及其免疫學(xué)機(jī)制，為探索炎性關(guān)節(jié)炎新的治療藥物提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法：本研究首先利用牛II型膠原建立Wistar大鼠CIA模型，造模成功后隨機(jī)分為正常對(duì)照組、CIA模型對(duì)照組、布洛芬陽性藥物對(duì)照組、甲氨蝶呤陽性藥物對(duì)照組和洛伐他汀治療組。分別觀察各給藥組大鼠的體重、測(cè)量不同

2、時(shí)間點(diǎn)大鼠的后足容積，并對(duì)關(guān)節(jié)炎的腫脹程度進(jìn)行評(píng)分；同時(shí)以ELISA檢測(cè)各組血清的TNF-α，IL-6，IL-8及IP-10的水平；用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)大鼠IL-1β及IL-17 mRNA的表達(dá)量；對(duì)各治療組大鼠的踝關(guān)節(jié)拍攝X線片，評(píng)價(jià)CIA大鼠的軟骨和骨的破壞程度；同時(shí)對(duì)各組大鼠踝關(guān)節(jié)的滑膜進(jìn)行HE染色及免疫組化染色，用免疫組織化學(xué)的方法，分析大鼠踝關(guān)節(jié)滑膜中單核細(xì)胞趨化蛋白(MCP)-1和調(diào)節(jié)激活正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因(RA

3、NTES)的表達(dá)情況，分析其在CIA發(fā)病中的作用。
　　 結(jié)果：1.CIA模型的建立：在初次免疫II型膠原后的第11～13d，大鼠后足趾開始發(fā)紅，輕度腫脹，第17d后足背及踝關(guān)節(jié)紅腫加重，大鼠足墊增厚，活動(dòng)量減少，食欲下降。
　　 2.踝關(guān)節(jié)腫脹程度的變化：布洛芬及洛伐他汀組大鼠的踝關(guān)節(jié)腫脹程度于第3w開始下降，第4w時(shí)洛伐他汀組的后足容積較CIA組下降顯著(P<0.05)。關(guān)節(jié)炎評(píng)分在第Sw時(shí)較CIA組顯著降低(P<0

4、.01)，兩組有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。
　　 3.細(xì)胞因子的變化：免疫后第5w，洛伐他汀組、布洛芬組和MTX組顯著低于CIA組大鼠的血清TNF-α，IL-6及IP-10的水平(P<0.05)，而洛伐他汀組和MTX組的IL-8水平較CIA組大鼠無顯著下降(P>0.05)。洛伐他汀及MTX組IL-1β及IL-17 mRNA的表達(dá)量顯著低于CIA組(P<0.05)
　　 4.影像學(xué)改變：CIA組大鼠X線顯示大鼠后足關(guān)節(jié)軟組織腫脹，

5、骨質(zhì)疏松伴有骨質(zhì)破壞，洛伐他汀組、布洛芬組和MTX組大鼠的X線顯示關(guān)節(jié)周圍軟組織腫脹、無骨質(zhì)疏松和骨質(zhì)破壞。
　　 5.組織病理學(xué)改變：與CIA組相比，洛伐他汀組、布洛芬組和MTX組關(guān)節(jié)滑膜組織充血水腫較CIA組明顯減輕，滑膜細(xì)胞輕度增生，炎性細(xì)胞浸潤較少，血管增生和血管翳形成大大減少。未見關(guān)節(jié)軟骨變形、壞死或剝脫。
　　 6.關(guān)節(jié)滑膜MCP-1和RANTES的表達(dá)：洛伐他汀組、布洛芬組和MTX組大鼠表達(dá)MCP-1和RA

6、NTES陽性的細(xì)胞較CIA組顯著減少。
　　 結(jié)論：1.洛伐他汀對(duì)膠原誘導(dǎo)性大鼠關(guān)節(jié)炎具有緩解癥狀、抑制炎癥腫脹的作用，與CIA模型組相比，療效顯著。
　　 2.洛伐他汀能夠抑制TNF-α，IL-6，IL-1β，IL-17，IP-10，MCP-1和RANTES的水平，其作用機(jī)制可能是通過抑制這些細(xì)胞因子的表達(dá)，而達(dá)到阻斷免疫復(fù)合物的形成及維持細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的平衡，從而抑制滑膜的增生、炎性細(xì)胞的浸潤和軟骨侵蝕的。
　　

7、 3.CIA組大鼠關(guān)節(jié)滑膜中可見MCP-1和RANTES陽性細(xì)胞的表達(dá)，且在洛伐他汀治療后其表達(dá)量減少，說明MCP-1和RANTES在CIA的發(fā)病機(jī)制中有重要意義。
　　 第二部分巴曲酶對(duì)大鼠膠原性關(guān)節(jié)炎的治療作用及免疫學(xué)機(jī)制
　　 目的：本研究以膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(CIA)大鼠為模型，評(píng)價(jià)巴曲酶對(duì)CIA的抗炎療效及其免疫學(xué)機(jī)制，為探索炎性關(guān)節(jié)炎新的治療藥物提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法：本研究首先利用牛II型膠原建

8、立Wistar大鼠CIA模型，造模成功后隨機(jī)分為正常對(duì)照組、生理鹽水CIA模型對(duì)照組、布洛芬陽性藥物對(duì)照組、甲氨蝶呤陽性藥物對(duì)照組和巴曲酶大、小劑量治療組。分別觀察各給藥組大鼠的體重變化、測(cè)量不同時(shí)間點(diǎn)大鼠的后足容積，并對(duì)關(guān)節(jié)炎的腫脹程度進(jìn)行評(píng)分；檢測(cè)血漿纖維蛋白原水平；并用ELISA檢測(cè)各組血清的TNF-α，IL-6，IL-8，IP-10，單核細(xì)胞趨化蛋白(MCP)-1和調(diào)節(jié)激活正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(RANTES)的水平；用實(shí)時(shí)熒

9、光定量PCR方法檢測(cè)大鼠IL-1β及IL-17mRNA的表達(dá)量；對(duì)各治療組大鼠的踝關(guān)節(jié)拍攝X線片，評(píng)價(jià)CIA大鼠的軟骨和骨的破壞程度；同時(shí)對(duì)各組大鼠踝關(guān)節(jié)的滑膜進(jìn)行HE染色，分析其在CIA發(fā)病中的作用。
　　 結(jié)果：
　　 1.CIA模型的建立：在初次免疫II型膠原后的第11～13d，Wistar大鼠后足趾開始發(fā)紅.輕度腫脹，第17d后足背及踝關(guān)節(jié)紅腫加重，大鼠足墊增厚，活動(dòng)量減少，食欲下降。
　　 2.踝關(guān)節(jié)腫

10、脹程度的變化：免疫后第5w，巴曲酶大、小劑量組大鼠的后足容積較CIA組顯著下降(P<0.05)。大、小劑量組的關(guān)節(jié)炎評(píng)分自19d顯著下降，在第5w時(shí)與CIA組相比顯著降低(P<0.05)。
　　 3.血漿纖維蛋白原(Fg)的檢測(cè)：第2w時(shí)測(cè)定Fg，巴曲酶大劑量組即可見顯著降低(P<0.05)，第Sw時(shí)，各治療組Fg均較CIA組顯著降低(P<0.05)。
　　 4.細(xì)胞因子水平的檢測(cè)：免疫后第5w，巴曲酶大、小劑量組、布洛

11、芬組和MTX組顯著低于CIA組大鼠的TNF-α，IL-6及RANTES的水平(P<0.05)，IP-10的水平在巴曲酶大劑量組、布洛芬組及MTX組的水平較CIA組顯著降低(P<0.05)，MCP-1和IL-8的水平在巴曲酶大劑量組及布洛芬組的表達(dá)顯著低于CIA組。巴曲酶大、小劑量組IL-17 mRNA的表達(dá)顯著低于CIA組(P<0.05)，但I(xiàn)L-ipmRNA的表達(dá)與CIA組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 5.影像學(xué)改變：巴曲酶大、小

12、劑量組、布洛芬組和MTX組大鼠的X線顯示關(guān)節(jié)周圍軟組織腫脹、無骨質(zhì)疏松和骨質(zhì)破壞。
　　 6.組織病理學(xué)改變：與CIA組相比，巴曲酶大、小劑量組、布洛芬組和MTX組關(guān)節(jié)滑膜組織充血水腫較CIA組明顯減輕，滑膜細(xì)胞輕度增生，炎性細(xì)胞浸潤較少，未見關(guān)節(jié)軟骨變形、壞死或剝脫。
　　 結(jié)論：
　　 1.巴曲酶可顯著緩解CIA大鼠關(guān)節(jié)炎的癥狀、抑制炎癥腫脹，與CIA模型組相比，療效顯著。
　　 2.巴曲酶對(duì)纖維蛋白