胰島素抑制小鼠胰腺β細(xì)胞VGLUT2基因表達(dá).pdf

1、[目的]
　　 2型糖尿病(Type2 diabetes mellitus)是一種由多因素相互作用形成的常見(jiàn)的內(nèi)分泌代謝疾病，在糖尿病的發(fā)病過(guò)程中胰島素分泌起著非常重要的作用；以谷氨酸作為信使分子的胰島素分泌系統(tǒng)稱為谷氨酰胺能系統(tǒng)，這一系統(tǒng)是整個(gè)胰島素分泌機(jī)制中的重要組成部分，而由囊泡谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)子轉(zhuǎn)運(yùn)谷氨酸進(jìn)入胰島素分泌囊泡的過(guò)程是整個(gè)胰島素分泌過(guò)程中的限速步驟。本課題從胰島素對(duì)于小鼠VGLUT2(mVGLUT2)基因表達(dá)調(diào)控入

2、手，觀察這一調(diào)控機(jī)制在胰島素調(diào)節(jié)β細(xì)胞功能中的作用，探討這一作用對(duì)于胰島素分泌的影響及其在2型糖尿病發(fā)生中的意義。
　　 [方法]
　　 在體外培養(yǎng)小鼠β細(xì)胞系MIN6，觀察不同濃度的胰島素水平作用下，利用promega公司的Dual-Luciferase Reporter Assay System檢測(cè)mVGLUT2基因的啟動(dòng)子活性，利用Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)mVGLUT2基因mRNA表達(dá)水平，及利用west

3、en blot檢測(cè)mVGLUT2基因蛋白質(zhì)水平的變化，初步確定胰島素對(duì)mVGLUT2基因表達(dá)的調(diào)控作用及具體作用環(huán)節(jié)；最后利用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度的胰島素水平作用時(shí)間下小鼠β細(xì)胞系MIN6細(xì)胞C-肽的分泌量，從而間接反映胰島素對(duì)MIN6細(xì)胞的分泌作用的影響。
　　 [結(jié)果]
　　 胰島素抑制了mVGLUT2啟動(dòng)子活性，mVGLUT2的mRNA表達(dá)水平及蛋白質(zhì)表達(dá)水平下降，小鼠β細(xì)胞系MIN6的C-肽分泌功能下降。

4、
　　 [結(jié)論]
　　 無(wú)糖條件下胰島素抑制了mVGLUT2啟動(dòng)子活性表達(dá)，利用Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)mVGLUT2基因mRNA表達(dá)水平，及利用westen blot檢測(cè)mVGLUT2基因蛋白質(zhì)水平的變化，得出胰島素反饋抑制mVGLUT2基因表達(dá)的最佳時(shí)間點(diǎn)。ELISA法檢測(cè)細(xì)胞的C-肽分泌情況，間接反映小鼠β細(xì)胞系MIN6細(xì)胞的分泌功能下降；提示胰島素對(duì)小鼠VGLUT2(mVGLUT2)基因調(diào)節(jié)有重要的抑制