趨化性細(xì)胞因子CCL18對(duì)黑素瘤細(xì)胞系生物學(xué)行為影響的研究.pdf

1、皮膚惡性黑素瘤是一種高度惡性腫瘤，目前研究認(rèn)為任何細(xì)胞都能分泌細(xì)胞因子并表達(dá)其受體，而細(xì)胞因子在腫瘤細(xì)胞的表達(dá)已引起廣泛的關(guān)注和研究，它們是腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的路標(biāo)。部分黑素瘤細(xì)胞系能產(chǎn)生細(xì)胞因子并表達(dá)其受體，無論阻斷配體還是受體都能抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。我們的前期研究，采用全人類基因組芯片對(duì)中國(guó)人肢端黑素瘤組織的研究發(fā)現(xiàn)，趨化性細(xì)胞因子CCL18在腫瘤組織的表達(dá)明顯增高。本研究利用IL-4誘導(dǎo)人單核細(xì)胞產(chǎn)生的CCL18、重組CCL18細(xì)胞

2、因子與A375黑素瘤細(xì)胞株共培養(yǎng)，探討其在黑素瘤生物學(xué)行為方面的作用。
　　 第一部分：人單核細(xì)胞的分離、誘導(dǎo)及CCL18表達(dá)的檢測(cè)
　　 使用密度梯度離心法成功分離人單核細(xì)胞，并使用IL-4成功誘導(dǎo)單核細(xì)胞，經(jīng)ELISA和Western-blotting驗(yàn)證，誘導(dǎo)的單核細(xì)胞可產(chǎn)生CCL18，非誘導(dǎo)的單核細(xì)胞不能產(chǎn)生CCL18。
　　 第二部分：CCL18細(xì)胞因子對(duì)A375黑素瘤細(xì)胞株增殖、轉(zhuǎn)移及血管增殖的影響<

3、br>　　 誘導(dǎo)人單核細(xì)胞產(chǎn)生CCL18，與重組人CCL18細(xì)胞因子，分別與A375黑素瘤細(xì)胞株共培養(yǎng)，通過MTT法檢測(cè)CCL18對(duì)A375增殖的影響；通過趨化試驗(yàn)及重組基底膜侵襲實(shí)驗(yàn)，測(cè)定CCL18對(duì)腫瘤細(xì)胞的趨化能力及侵襲作用；通過將A375黑素瘤細(xì)胞株接種于雞胚尿囊膜，測(cè)定不同情況下CCL18對(duì)腫瘤血管生成的影響。結(jié)果提示無論是誘導(dǎo)還是重組CCL18細(xì)胞因子都不是影響腫瘤增殖的主要細(xì)胞因子，IL-4誘導(dǎo)產(chǎn)生CCL18的單核細(xì)胞組

4、及CCL18重組細(xì)胞因子組與對(duì)照組比較均對(duì)腫瘤細(xì)胞存在趨化作用，并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移；IL-4誘導(dǎo)組及重組CCL18組在雞胚尿囊膜試驗(yàn)中可促進(jìn)腫瘤血管的生成作用。
　　 第三部分：CCL18細(xì)胞因子對(duì)A375黑素瘤細(xì)胞裸鼠內(nèi)成瘤作用的影響
　　 裸鼠成瘤的模型顯示，CCL18細(xì)胞因子可能以某種機(jī)制抑制A370移植瘤體積的增加。腫瘤組織切片經(jīng)Ki-67、Bcl-2免疫組化染色及TUNEL原位凋亡染色后分析，發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)及重組C

5、CL18在A375黑素瘤細(xì)胞系體內(nèi)試驗(yàn)中可促進(jìn)腫瘤的增殖，抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡。
　　 第四部分：免疫組化研究CCL18在皮膚惡性黑素瘤的表達(dá)
　　 使用免疫組化對(duì)67例黑素細(xì)胞來源的良、惡性腫瘤進(jìn)行分析，結(jié)果顯示良性痣、Spitz痣及發(fā)育不良性痣不表達(dá)CCL18，而黑素瘤表達(dá)CCL18，且CCL18的表達(dá)與腫瘤浸潤(rùn)深度呈正比。
　　 第五部分：小結(jié)
　　 CCL18可能與黑素瘤的進(jìn)展有關(guān)，并調(diào)節(jié)腫瘤的生物