對(duì)我國2012～2015年部分地區(qū)雞AIV H9N2流行株的流行變異及抗原性研究.pdf

1、中國大陸于1994年在廣東省首次報(bào)道并分離得到H9N2亞型禽流感病毒，隨后該亞型病毒廣泛傳播至我國大部分省區(qū)。近年來，關(guān)于H9N2亞型禽流感病毒的分離報(bào)道呈持續(xù)上升態(tài)勢(shì)，該病的流行每年都給我國養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。同時(shí)H9N2亞型禽流感病毒還可以為新出現(xiàn)感染人的H7N9、H10N8亞型禽流感病毒提供內(nèi)部基因，潛在威脅人類健康安全，具有重要的經(jīng)濟(jì)和公共衛(wèi)生意義。
　　為弄清H9N2病毒在我國的流行變異情況，本研究對(duì)2012～201

2、5年分離到的42株H9N2亞型AIV進(jìn)行全基因組測(cè)序和遺傳進(jìn)化樹構(gòu)建，并選取其中的18株代表株制備單因子血清，進(jìn)行交叉HI試驗(yàn)，以此來研究H9N2流行株之間的抗原性分化情況，最后用免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn)，評(píng)價(jià)毒株Ck/GX/SIC6/13對(duì)流行株的免疫保護(hù)效果。
　　遺傳進(jìn)化分析表明：42株H9N2病毒均屬于Ck/Bei-like分支（h9.4.2），其中97.6％（41/42）的分離株屬于h9.4.2.5亞分支，2.4%（1/42）的分離

3、株屬于h9.4.2.6亞分支，其HA基因之間的核苷酸相似性為86.7%~99.7%，與經(jīng)典疫苗株的相似性為88.6%~92.6%。分離株形成4種不同的重組基因型（S，U，V，W），基因型S是流行的主基因型，占研究毒株的92.8%（39/42）；基因型V、W為新重組基因型，其中基因型V和基因型W分別整合了來源于G9-like譜系的NA基因和wild waterfowl-like譜系的PB2基因，使H9N2病毒的基因重組現(xiàn)象愈加復(fù)雜化。

4、r>　　特定氨基酸位點(diǎn)分析表明：所有分離株的HA蛋白裂解位點(diǎn)有兩種模式，分別為PSRSSR↓GLF（97.6%，41/42)和PARSSR↓GLF（2.4%，1/42），沒有多個(gè)連續(xù)堿性氨基酸插入，均符合低致病性禽流感病毒的分子特征。部分毒株的HA受體結(jié)合位點(diǎn)模式與人流感病毒受體結(jié)合位點(diǎn)類似，92.8%（39/42）的毒株在HA蛋白上出現(xiàn)了與哺乳動(dòng)物適應(yīng)性相關(guān)的Q226→L突變；95.2%（40/42）的病毒在NA莖部出現(xiàn)了與毒力增強(qiáng)相

5、關(guān)的63-65位點(diǎn)三個(gè)氨基酸缺失；97.6%（41/42）的毒株M2蛋白發(fā)生了與金剛烷等藥物耐藥性相關(guān)的S31→N突變；本研究分離株中僅有2.4%（1/42）的毒株在PB2基因中出現(xiàn)E627→K，沒有D701→N突變出現(xiàn)。
　　交叉HI試驗(yàn)結(jié)果表明：18株新分離株單因子抗血清對(duì)于相同和不同病毒抗原的HI效價(jià)差異為0~9 log2，它們之間的抗原相關(guān)性R值為0.41~1，說明即使來源同一分支的H9N2亞型AIV，其抗原性也正在逐漸分

6、化，抗原性差異各異的流行株同時(shí)存在給該病的防控帶來困難。本研究根據(jù)遺傳進(jìn)化樹和交叉HI實(shí)驗(yàn)結(jié)果，將18株新分離株分為3個(gè)抗原群（A、B、C），結(jié)合HA基因進(jìn)化分支和毒株分離時(shí)間及地點(diǎn)等因素，3個(gè)抗原群的出現(xiàn)大致呈現(xiàn)出A→B→C的先后關(guān)系。
　　免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn)表明：H9N2早期分離株制備的滅活疫苗對(duì)現(xiàn)今H9N2流行毒株不能起到有效保護(hù)，對(duì)A群病毒的保護(hù)率僅為30%~50%；毒株Ck/GX/SIC6/13制備的滅活疫苗也只能保護(hù)本毒株的