我國部分地區(qū)種雞場沙門菌流行現(xiàn)狀調(diào)查、耐藥性分析及分子分型.pdf

1、沙門菌病(Salmonellosis)是指由沙門菌屬(Salmonella)細(xì)菌所引起的各種動物及人的疾病的總稱，是世界動物衛(wèi)生組織法定報告的動物疾病，是我國政府規(guī)定的二類動物疫病，是《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012-2020年）》確定的優(yōu)先防治的病種。沙門菌感染的畜禽及其被污染的產(chǎn)品是食源性沙門菌的重要來源之一，這不僅阻礙了畜禽相關(guān)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，而且也對人類健康構(gòu)成了巨大威脅。種雞養(yǎng)殖是養(yǎng)雞業(yè)上游的生產(chǎn)環(huán)節(jié)，減少這一環(huán)節(jié)雞群中沙門

2、菌的感染能夠有效降低其后代次雞群及其相關(guān)產(chǎn)品的沙門菌檢出比例。許多發(fā)達(dá)國家在種雞群中采取的檢疫淘汰制度有效控制甚至消滅了雞白痢、雞傷寒沙門菌在雞群中的傳播;近年來這些國家的沙門菌流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示雞群中副傷寒沙門菌如腸炎沙門菌、鼠傷寒沙門菌、肯塔基沙門菌等開始成為優(yōu)勢血清型。目前針對我國種雞場雞群中沙門菌感染情況的研究還不是很多，種雞養(yǎng)殖過程中不同階段的沙門菌流行規(guī)律、防控關(guān)鍵點(diǎn)還不是完全清晰。本研究以國內(nèi)不同地區(qū)的7家種雞場為研究對

3、象，調(diào)查了種雞養(yǎng)殖場中沙門菌的流行狀況、血清型分布及藥物敏感性特點(diǎn)，并以其中一個規(guī)?；N雞場作為場內(nèi)流行規(guī)律調(diào)查分析的樣板，分階段分析流行狀況，綜合應(yīng)用CRISPR、PFGE分子分型技術(shù)分析不同沙門菌分離株之間的內(nèi)在聯(lián)系，期望探明國內(nèi)種雞場沙門菌的流行現(xiàn)狀及傳播特點(diǎn)，摸清種雞養(yǎng)殖過程中的防控關(guān)鍵點(diǎn)，為種雞場沙門菌的科學(xué)有效防控提供依據(jù)。
　　一、種雞場沙門菌的分離鑒定及耐藥性分析
　　在2015年6月至2017年3月期間，對

4、A、B、C、D、E、F、G共7家種雞場進(jìn)沙門菌的分離鑒定，共采集樣品2，185份，分離沙門菌326株，總體分離率為14.92％。統(tǒng)計學(xué)分析表明，不同種雞場沙門菌分離率存在差異(P＜0.05)，分離率最高可達(dá)18.37％,最低的一家種雞場則尚未分離到沙門菌。針對F種雞場不同養(yǎng)殖階段沙門菌分離率的調(diào)查研究表明，產(chǎn)蛋期和孵化期的沙門菌分離率較高，分別達(dá)到24.66％和24.52％;而引種階段的分離率則相對較低，為6.67％。統(tǒng)計分析表明，在種

5、雞養(yǎng)殖的各個階段中，引種階段、育雛期、產(chǎn)蛋期沙門菌分離率逐漸上升;產(chǎn)蛋期和孵化期的沙門菌分離率維持在較高水平;孵化期到孵化后期沙門菌分離率有所下降。7家種雞場分離的沙門菌血清型鑒定結(jié)果顯示，腸炎沙門菌是優(yōu)勢血清型，其次是雞-雛沙門菌，而其他血清型分布比例則相對較小。研究對A、B、F、G四家種雞場分離的223株沙門菌進(jìn)行了16種抗菌素藥物敏感性試驗(yàn)，整體情況顯示，萘啶酸耐藥比例最高，達(dá)94.62％;其次是氨芐西林，耐藥率為56.05％;鏈

6、霉素的耐藥率也相對較高，為39.91％。多重耐藥統(tǒng)計結(jié)果顯示，細(xì)菌耐藥種類在1-3種的比例最高，達(dá)76.23％;耐藥種類在4-6種之間的比例為17.94％;7種及以上的比例相對較低。分析F種雞場中沙門菌的耐藥情況，細(xì)菌同樣對萘啶酸表現(xiàn)出很高的耐藥率，達(dá)91.30％;分析不同養(yǎng)殖階段沙門菌的多重耐藥分布情況，產(chǎn)蛋期分離細(xì)菌的多重耐藥種類明顯增多，并且16種測定藥物中有11種藥物都在產(chǎn)蛋期時耐藥率最高。
　　二、不同分子分型技術(shù)在種雞

7、場沙門菌傳播規(guī)律及溯源研究上的應(yīng)用
　　本研究首先對F種雞場不同養(yǎng)殖階段分離的115株腸炎沙門菌進(jìn)行了CRISPR分型，結(jié)果顯示所有的腸炎沙門菌被分類成了3種CRISPR型，這表明F種雞場內(nèi)存在有基因型不同的多種腸炎沙門菌克隆亞群。此外，研究還發(fā)現(xiàn)同種CRISPR型的腸炎沙門菌往往來自于多個分離階段，這表明種雞場中可能存在沙門菌的交叉?zhèn)鞑?。引種階段分離的SET1型和SET2型腸炎沙門菌，同樣能在其后的養(yǎng)殖階段中被發(fā)現(xiàn)，說明引種階段

8、的沙門菌傳播至其后的養(yǎng)殖階段，提示引種階段可能是沙門菌防控的一個關(guān)鍵環(huán)節(jié)。CRISPR型和耐藥表型的聯(lián)合分析顯示，同一CRISPR型的細(xì)菌耐藥譜往往完全或部分相似;耐藥種類和CRISPR型的對應(yīng)統(tǒng)計結(jié)果還顯示SET2和SET3型的細(xì)菌耐藥譜數(shù)目都較為相似。這些結(jié)果提示，CRISPR分型技術(shù)可能在單一血清型分子亞分型中提供了較好的亞類區(qū)分。對存在供貨關(guān)系的G和F兩家種雞場的60株腸炎沙門菌進(jìn)行PFGE分型，PFGE聚類分析共分成了4個聚類

9、簇，其中PFGE聚類簇A既包含17株G種雞場來源的腸炎沙門菌，還有32株則來源于F種雞場。這一結(jié)果提示，供需鏈間種苗雞的引入是F種雞場沙門菌傳播來源的途徑之一。同時，研究還發(fā)現(xiàn)除PFGE聚類簇A外，細(xì)菌還分成了幾類細(xì)菌數(shù)目相對較少的PFGE聚類簇B、C和D，分析每個聚類簇中細(xì)菌的來源，發(fā)現(xiàn)PFGE聚類簇C的細(xì)菌都來源于F種雞場，PFGE聚類簇B和D則都屬于G種雞場，這些結(jié)果說明供需鏈間沙門菌的傳播感染還存在其他途徑，不同沙門菌亞型在雞場