豬繁殖與呼吸綜合征病毒結(jié)構(gòu)蛋白單克隆抗體的制備及其抗原表位的鑒定.pdf

1、本研究首先構(gòu)建了含PRRSVCH-1a株各結(jié)構(gòu)蛋白的重組表達(dá)載體pET30a-N、pGEX6p-rtM、pGEX6p-rtGP5、pET30a-GP4、pGEX6p-rtGP3和pGEX6p-rtGP2，并在大腸桿菌中進(jìn)行了表達(dá)，利用PRRSV感染豬血清對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行Westernblot分析，證實(shí)表達(dá)的六個(gè)融合蛋白都具有較好的反應(yīng)活性。然后以PRRSV和表達(dá)的融合蛋白為抗原，免疫BALB/c小鼠，最終共獲得了16株針對(duì)N蛋白的單抗，1

2、5株針對(duì)GP5蛋白的單抗，5株針對(duì)GP3蛋白的單抗以及針對(duì)M蛋白、GP4蛋白和GP2蛋白的單抗各1株?！　蛋白基因分為四個(gè)相互重疊的基因片段，對(duì)16株抗N蛋白的單抗進(jìn)行鑒定?！　±肕基因兩個(gè)相互重疊的片段M1(84-134aa)和M2(113-174aa)的融合表達(dá)產(chǎn)物對(duì)單抗M2B3進(jìn)行檢測(cè)。　　將GP5基因分為四個(gè)相互重疊的基因片段，對(duì)15株抗GP5蛋白單抗的抗原表位進(jìn)行鑒定，結(jié)果顯示有2株單抗既與GP5-P3表達(dá)產(chǎn)物又與

3、GP5-P4表達(dá)產(chǎn)物反應(yīng)，有13株單抗僅特異性識(shí)別GP5-P4的表達(dá)產(chǎn)物。用感染豬血清對(duì)四個(gè)融合蛋白的Westernblot分析結(jié)果證實(shí)GP5-P4是GP5的免疫優(yōu)勢(shì)區(qū)域。　　利用分段表達(dá)重疊基因片段的方法對(duì)抗GP3蛋白的5株單抗進(jìn)行鑒定。并利用氨基酸缺失的方法確定了GP3EP3的主要功能區(qū)域是由W74CRIGHDRCGED85組成，而GP3EP7的主要功能區(qū)域是由Y67EPGRSLW74組成?！　】傊狙芯吭谖覈?guó)PRRSVCH-1