免疫相關(guān)基因多態(tài)性與中國南方漢族婦女子宮內(nèi)膜異位癥易感性的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、研究背景:
　　 子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis，Ems)，簡稱內(nèi)異癥，指以子宮內(nèi)膜樣組織異位種植在子宮腔外，引起患者痛經(jīng)、不孕和月經(jīng)異常，是育齡婦女的常見病、多發(fā)病，發(fā)病率達(dá)10％～15％，還有逐年上升的趨勢(shì)，且臨床無特效治療方法。內(nèi)異癥所引起的疼痛和不孕嚴(yán)重影響女性的身心健康和生命質(zhì)量，但其發(fā)病機(jī)理目前仍有爭議。早在1921年Sampson提出經(jīng)血逆流種植學(xué)說，近百年來又發(fā)展了上皮化生學(xué)說、苗勒管殘跡學(xué)說、免疫學(xué)

2、說、經(jīng)脈管遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移學(xué)說、遺傳學(xué)說以及有害物質(zhì)致病學(xué)說等等，均難闡釋清楚。對(duì)作為這些觀點(diǎn)的主導(dǎo)理論——經(jīng)血逆流種植學(xué)說的基本質(zhì)疑是經(jīng)血逆流見于90％以上的育齡婦女，幾乎是生理現(xiàn)象，而僅10％～15％婦女罹患內(nèi)異癥。近年來有學(xué)者提出“在位內(nèi)膜決定論”，即內(nèi)異癥患者在位內(nèi)膜的生物學(xué)特質(zhì)，使其具備更強(qiáng)的黏附、侵襲和血管生成能力，這一內(nèi)在差異是內(nèi)異癥發(fā)病的決定因素，而免疫反應(yīng)及局部微環(huán)境等是附加因素，或只是繼發(fā)表現(xiàn)，或者是影響內(nèi)膜命運(yùn)的條件?；?/p>

3、以上觀點(diǎn)，目前認(rèn)為內(nèi)異癥的易感性在于遺傳素質(zhì)的差別。早在1997年Kennedy已指出，內(nèi)異癥是由多位點(diǎn)基因和環(huán)境因素相互作用導(dǎo)致的一種多因素遺傳性疾病，且不完全遵守孟德爾遺傳方式。疾病關(guān)聯(lián)研究已發(fā)現(xiàn)多個(gè)基因與內(nèi)異癥遺傳易感性相關(guān)，多基因位點(diǎn)變異很可能協(xié)同作用影響內(nèi)異癥的發(fā)生發(fā)展。人類可遺傳的變異中最常見的一種是單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNP)，可導(dǎo)致個(gè)體對(duì)疾病的易感性不同?；蚨鄳B(tài)

4、性可能通過基因轉(zhuǎn)錄活性的改變或蛋白表達(dá)的異常，影響個(gè)體對(duì)內(nèi)異癥的易感性及發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。
　　 內(nèi)異癥在臨床和病理上均表現(xiàn)為一種炎性過程，異位病灶的生長有賴于腹腔液中特殊的免疫微環(huán)境，且臨床流行病學(xué)及基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)異癥與免疫調(diào)節(jié)異常密切相關(guān)。目前關(guān)于基因多態(tài)性與內(nèi)異癥發(fā)病關(guān)系的研究更多的聚焦于與免疫調(diào)節(jié)有關(guān)的細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor

5、-alpha，TNF-α)、α2-HS糖蛋白(α2-Heremans-Schmidt glycoprotein，AHSG)、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growthfactor-β1，TGF-β1）、白細(xì)胞介素-2受體β（interleukin-2 receptorβ，IL-2Rβ）等。關(guān)于以上免疫相關(guān)基因多態(tài)性與內(nèi)異癥易感性的相關(guān)研究，查閱國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)，提示研究位點(diǎn)主要集中在IL-6基因-174G/C位點(diǎn)、TNF-

6、α基因-308G/A位點(diǎn)、AHSG基因第7外顯子Sac I位點(diǎn)和AHSG2位點(diǎn)、TGF-βI基因-509T/C位點(diǎn)以及IL-2Rβ基因-627C/T位點(diǎn)，由于不同人種遺傳背景差異導(dǎo)致研究結(jié)果不盡相同。關(guān)于中國尤其是南方漢族人群IL-6-634C/G(rs1800796)、TNF-α-1031T/C(rs1799964)、AHSG6826C/T(rs4917)、 TGF-β1-509T/C(rs1800469)和IL-2Rβ-627C/T

7、(rs228953)位點(diǎn)的研究，尚無研究數(shù)據(jù)報(bào)道。
　　 研究目的:
　　 探討中國南方漢族婦女免疫相關(guān)基因（IL-6-634C/G、TNF-α-1031T/C、AHSG6826C/T、TGF-β1-509T/C和IL-2Rβ-627C/T）多態(tài)性及其聯(lián)合基因多態(tài)性與內(nèi)異癥易感性的相關(guān)性。
　　 材料與方法:
　　 1.研究對(duì)象
　　 1.1.研究對(duì)象收集2008年10月～2010年4月在南方醫(yī)院

8、、珠江醫(yī)院及佛山市第一人民醫(yī)院婦產(chǎn)科行腹、盆腔手術(shù)并經(jīng)病理檢查確診為內(nèi)異癥者434例為內(nèi)異癥組;選擇同期在珠江醫(yī)院婦產(chǎn)科因輸卵管結(jié)扎、輸卵管復(fù)通、腹腔鏡下輸卵管通液、卵巢單純性囊腫、畸胎瘤等進(jìn)行腹、盆腔手術(shù)且術(shù)中及術(shù)后病理均未發(fā)現(xiàn)內(nèi)異癥病灶者502例為對(duì)照組。兩組受檢者年齡間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.016，P=0.310)。所有受檢者均無內(nèi)異癥家族史，無其它遺傳病家族史及腫瘤史。研究對(duì)象間不存在親緣關(guān)系，且均知情同意。
　　

9、1.2.標(biāo)本采集兩組受檢者均于手術(shù)后第3日留取外周血2mL，檸檬酸鈉抗凝后置于-20℃低溫冰箱中保存。
　　 2.實(shí)驗(yàn)方法
　　 2.1.DNA提取按E.Z.N.A.E-Z96 Blood DNA kit的說明書抽提血細(xì)胞基因組DNA。
　　 2.2.SNP分型采用以熒光定量PCR為基礎(chǔ)的高分辨率熔解曲線分析(HighResolution Melting，HRM)技術(shù)進(jìn)行SNP分型，根據(jù)儀器本身自帶的軟件，分析熔

10、解曲線，得出基因型。
　　 2.3.統(tǒng)計(jì)及分析方法用直接計(jì)數(shù)法計(jì)算各組基因頻率分布，數(shù)據(jù)均用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。遺傳平衡吻合度x2檢驗(yàn)群體基因頻率分布是否符合Hardy-Weinberg平衡定律。兩組之間等位基因及基因型頻率比較用x2檢驗(yàn)(α=0.05)。用比值比(odds ratio，OR)及95％可信區(qū)間(95％CI)表示相對(duì)危險(xiǎn)度。通過病例對(duì)照研究評(píng)估SNPs和內(nèi)異癥的相關(guān)性。
　　 結(jié)果:
　　

11、 1.兩組研究對(duì)象年齡分布內(nèi)異癥組平均年齡35.4+7.9歲（其中21人年齡數(shù)據(jù)丟失），對(duì)照組平均年齡34.9+4.5歲。兩組年齡分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.016，P=0.310)。
　　 2.兩組基因多態(tài)性分布中國南方漢族婦女中IL-6-634C/G、TNF-α-1031T/C、AHSG6826C/T、TGF-β1-509T/C和IL-2Rβ-627C/T位點(diǎn)呈多態(tài)性分布，且對(duì)照組IL-6-634C/G、TNF-α-103

12、1T/C、AHSG6826C/T和TGF-β1-509T/C位點(diǎn)基因頻率分布均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡(x2=0.075，P=0.784;x2=0.229，P=0.632;x2=1.875，P=0.171和x2=2.176，P=0.140)。由于5個(gè)基因位點(diǎn)的研究數(shù)據(jù)均來源于同一個(gè)人群，盡管內(nèi)異癥組和對(duì)照組IL-2Rβ-627C/T位點(diǎn)基因頻率分布均不符合Hardy-Weinberg遺傳平衡（x2=43.579，P=4.

13、071×10-11和x2=85.824，P=1.967×10-20），仍可說明納入的樣本具有人群代表性。
　　 3.單個(gè)基因多態(tài)性與內(nèi)異癥遺傳易感性
　　 3.1.兩組IL-6-634C/G位點(diǎn)基因分布內(nèi)異癥組和對(duì)照組等位基因C、G分布分別為78.6％、21.4％和74.3％、25.7％，基因型CC、CG、GG分布分別為63.4％、30.3％、6.3％和55.5％、37.7％、6.8％，兩組等位基因及基因型分布差異均有統(tǒng)

14、計(jì)學(xué)意義（x2=4.604，P=0.032和x2=6.215，P=0.045）。其中攜帶等位基因C使Ems發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)提高1.057倍（95％CI為1.005～1.112），而攜帶G使其降低0.835倍（95％CI為0.707～0.985）;攜帶基因型CG與CC相比患Ems的危險(xiǎn)度低0.704倍（95％CI為0.533～0.931）。
　　 3.2.兩組TNF-α-1031T/C位點(diǎn)基因分布內(nèi)異癥組和對(duì)照組等位基因T、C分布分別為7

15、9.2％、20.8％和81.8％、18.2％，基因型TT、TC、CC分布分別為63.7％、31.0％、5.3％和66.5％、30.5％、3.0％，兩組等位基因及基因型分布差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=1.994，P=0.158和x2=3.365，P=0.186）。
　　 3.3.兩組AHSG6826C/T位點(diǎn)基因分布內(nèi)異癥組和對(duì)照組等位基因C、T分布分別為79.1％、20.9％和74.3％、25.7％，基因型CC、CT、TT分布分別

16、為62.0％、34.0％、4.0％和54.1％、40.5％、5.4％，兩組等位基因及基因型分布差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=5.701，P=0.017和x2=6.158，P=0.046）。其中攜帶等位基因C使Ems發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)提高1.063倍（95％CI為1.011～1.118），而攜帶T使其降低0.817倍（95％CI為0.691～0.965），攜帶基因型CT與CC相比患Ems的風(fēng)險(xiǎn)低0.733倍（95％CI為0.559～0.962）。

17、>　　 3.4.兩組TGF-β1-509T/C位點(diǎn)基因分布內(nèi)異癥組和對(duì)照組等位基因T、C分布分別為58.4％、41.6％和56.1％、43.9％，基因型TT、TC、CC分布分別為33.8％、49.3％、16.9％和29.9％、52.5％、17.6％，兩組等位基因及基因型分布差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=1.033，P=0.309和x2=1.670，P=0.434）。
　　 3.5.兩組IL-2Rβ-627C/T位點(diǎn)基因分布內(nèi)異癥組

18、和對(duì)照組等位基因C、T分布分別為51.5％、48.5％和52.0％、48.0％，基因型CC、CT、TT分布分別為34.5％、34.0％、31.5％和37.4％、29.2％、33.4％，兩組等位基因及基因型分布差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=0.046，P=0.831和x2=2.540，P=0.281）。見表10。
　　 4.聯(lián)合基因型多態(tài)性與內(nèi)異癥遺傳易感性
　　 4.1.兩組TNF-α-1031T/C和IL-6-634C/G

19、聯(lián)合基因型分布內(nèi)異癥組和對(duì)照組聯(lián)合基因型TT+CC、TC+CC、CC+CC、TT+CG、TC+CG、CC+CG、TT+GG、TC+GG、CC+GG分布分別為39.4％、19.4％、4.6％、20.6％、8.8％、0.9％、3.5％、2.3％、0.5％和36.7％、17.4％、1.4％、26.1％、10.4％、1.2％、3.8％、2.6％、0.4％,兩組聯(lián)合基因型分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=13.153，P=0.107)。其中與聯(lián)合基因型

20、TT+CC攜帶者相比，其余聯(lián)合基因型攜帶者患Ems的風(fēng)險(xiǎn)均無顯著差異（P′均＞0.05）。
　　 4.2.兩組AHSG6826C/T和IL-6-634C/G聯(lián)合基因型分布內(nèi)異癥組和對(duì)照組聯(lián)合基因型CC+CC、CT+CC、TT+CC、CC+CG、CT+CG、TT+CG、CC+GG、CT+GG、TT+GG分布分別為40.3％、20.6％、2.5％、17.8％、11.1％、1.4％、3.9％、2.3％、0.0％和29.7％、22.4％

21、、3.4％、20.4％、15.2％、2.0％、4.0％、2.8％、0.0％,兩組聯(lián)合基因型分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=12.987，P=0.072)。其中與聯(lián)合基因型CC+CC攜帶者相比，CT+CG攜帶者患Ems的風(fēng)險(xiǎn)低0.537倍(95％CI為0.352～0.820，P′=0.028)，其余聯(lián)合基因型攜帶者患Ems的風(fēng)險(xiǎn)均無顯著差異(P′均＞0.05)。
　　 4.3.兩組TGF-β1-509T/C和IL-6-634C/G聯(lián)合

22、基因型分布內(nèi)異癥組和對(duì)照組聯(lián)合基因型TT+CC、TC+CC、CC+CC、TT+CG、TC+CG、CC+CG、TT+GG、TC+GG、CC+GG分布分別為20.4％、33.6％、9.7％、11.6％、13.0％、5.6％、1.9％、2.8％、1.6％和17.2％、28.5％、9.8％、10.2％、20.8％、6.6％、2.4％、3.2％、1.2％,兩組聯(lián)合基因型分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=13.118，P=0.108)。其中與聯(lián)合基因型T

23、T+CC攜帶者相比，TC+CG攜帶者患Ems的風(fēng)險(xiǎn)低0.526倍(95％CI為0.339～0.817，P′=0.032)，其余聯(lián)合基因型攜帶者患Ems的風(fēng)險(xiǎn)均無顯著差異(P′均＞0.05)。
　　 4.4.兩組IL-2Rβ-627C/T和IL-6-634C/G聯(lián)合基因型分布內(nèi)異癥組和對(duì)照組聯(lián)合基因型CC+CC、CT+CC、TT+CC、CC+CG、CT+CG、TT+CG、CC+GG、CT+GG、TT+GG分布分別為20.7％、21

24、.7％、20.7％、10.7％、10.7％、9.1％、3.0％、1.6％、1.6％和19.9％、16.7％、18.9％、14.7％、10.5％、12.9％、2.8％、2.0％、1.6％，兩組聯(lián)合基因型分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=9.489，P=0.303）。其中與聯(lián)合基因型CC+CC攜帶者相比，其余所有聯(lián)合基因型攜帶者患Ems的風(fēng)險(xiǎn)均無顯著差異（P′均＞0.05）。
　　 4.5.兩組AHSG6826C/T和TNF-α-1031

25、T/C聯(lián)合基因型分布內(nèi)異癥組和對(duì)照組聯(lián)合基因型CC+TT、CT+TT、TT+TT、CC+TC、CT+TC、TT+TC、CC+CC、CT+CC、TT+CC分布分別為38.2％、22.7％、2.8％、20.1％、9.7％、1.2％、3.7％、1.6％、0.0％和35.7％、26.9％、4.0％、16.6％、12.8％、1.0％、1.8％、0.8％、0.2％,兩組聯(lián)合基因型分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=12.762，P=0.120)。其中與聯(lián)合

26、基因型CC+TT攜帶者相比，其余所有聯(lián)合基因型攜帶者患Ems的風(fēng)險(xiǎn)均無顯著差異（P′均＞0.05）。
　　 4.6.兩組TGF-β1-509T/C和TNF-α-1031T/C聯(lián)合基因型分布內(nèi)異癥組和對(duì)照組聯(lián)合基因型TT+TT、TC+TT、CC+TT、TT+TC、TC+TC、CC+TC、TT+CC、TC+CC、CC+CC分布分別為23.8％、31.0％、8.8％、8.1％、15.0％、7.9％、1.9％、3.2％、0.2％和19.

27、6％、34.5％、12.4％、10.0％、15.8％、4.6％、0.2％、2.2％、0.6％,兩組聯(lián)合基因型分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=18.814，P=0.012)。其中與聯(lián)合基因型TT+TT攜帶者相比，其余聯(lián)合基因型攜帶者患Ems的風(fēng)險(xiǎn)均無顯著差異(P′均＞0.05)。
　　 4.7.兩組IL-2Rβ-627C/T和TNF-α-1031T/C聯(lián)合基因型分布內(nèi)異癥組和對(duì)照組聯(lián)合基因型CC+TT、 CT+TT、 TT+TT、 C

28、C+TC、 CT+TC、 TT+TC、 CC+CC、CT+CC、 TT+CC分布分別為21.0％、22.4％、20.3％、12.8％、8.4％、9.8％、0.7％、3.3％、1.4％和24.0％、19.0％、23.8％、11.3％、9.9％、9.1％、2.2％、0.2％、0.6％,兩組聯(lián)合基因型分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=22.939, P=0.001)。其中與聯(lián)合基因型CC+TT攜帶者相比，CT+CC攜帶者患Ems的風(fēng)險(xiǎn)高18.511

29、倍(95％CI為2.390～143.383，P′=0.000)，其余聯(lián)合基因型攜帶者患Ems的風(fēng)險(xiǎn)均無顯著差異（P′均＞0.05）。
　　 4.8.兩組TGF-β1-509T/C和AHSG6826C/T聯(lián)合基因型分布內(nèi)異癥組和對(duì)照組聯(lián)合基因型TT+CC、 TC+CC、 CC+CC、 TT+CT、 TC+CT、 CC+CT、 TT+TT、TC+TT、 CC+TT分布分別為19.4％、31.5％、1.1％、13.9％、16.0％、4

30、.2％、0.5％、1.9％、1.6％和15.8％、30.9％、7.4％、13.4％、18.2％、8.8％、0.6％、3.4％、1.4％,兩組聯(lián)合基因型分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=15.708, P=0.042)。其中與聯(lián)合基因型TT+CC攜帶者相比，CC+CT攜帶者患Ems的風(fēng)險(xiǎn)低0.385倍(95％CI為0.205～0.721, P′=0.016)，其余聯(lián)合基因型攜帶者患Ems的風(fēng)險(xiǎn)均無顯著差異(P′均＞0.05)。
　　 4

31、.9.兩組TGF-β1-509T/C和IL-2Rβ-627C/T聯(lián)合基因型分布內(nèi)異癥組和對(duì)照組聯(lián)合基因型TT+CC、 TC+CC、 CC+CC、 TT+CT、 TC+CT、 CC+CT、 TT+TT、TC+TT、 CC+TT分布分別為12.8％、16.3％、5.4％、10.5％、17.5％、6.1％、10.5％、15.4％、5.6％和12.1％、18.1％、7.2％、9.5％、15.1％、4.6％、8.5％、19.1％、5.8％,兩組聯(lián)

32、合基因型分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=6.650, P=0.575)。其中與聯(lián)合基因型TT+CC攜帶者相比，其余所有聯(lián)合基因型攜帶者患Ems的風(fēng)險(xiǎn)均無顯著差異(P′均＞0.05)。
　　 4.10.兩組IL-2Rβ-627C/T和AHSG6826C/T聯(lián)合基因型分布內(nèi)異癥組和對(duì)照組聯(lián)合基因型CC+CC、 CT+CC、 TT+CC、 CC+CT、 CT+CT、 TT+CT、 CC+TT、CT+TT、 TT+TT分布分別為19.6％、

33、22.1％、20.5％、13.3％、10.5％、10.0％、1.6％、1.4％、0.9％和18.8％、14.7％、20.4％、16.5％、12.7％、11.5％、2.2％、1.6％、1.6％，兩組聯(lián)合基因型分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=11.404，P=0.180)。其中與聯(lián)合基因型CC+CC攜帶者相比，其余所有聯(lián)合基因型攜帶者患Ems的風(fēng)險(xiǎn)均無顯著差異（P′均＞0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1.中國南方漢族婦女中，I

34、L-6-634C/G和AHSG6826C/T位點(diǎn)多態(tài)性與內(nèi)異癥發(fā)生相關(guān)，然而，TNF-α-1031T/C、TGF-β1-509T/C和IL-2Rβ-627C/T位點(diǎn)多態(tài)性與內(nèi)異癥發(fā)生無明顯關(guān)聯(lián)。
　　 2.中國南方漢族婦女中，TGF-β1-509T/C和TNF-α-1031T/C、IL-2Rβ-627C/T和TNF-α-1031T/C、TGF-β1-509T/C和 AHSG6826C/T、AHSG6826C/T和IL-6-634

35、C/G、TGF-β1-509T/C和IL-6-634C/G聯(lián)合基因型多態(tài)性與內(nèi)異癥發(fā)生相關(guān)，然而，TNF-α-1031T/C和IL-6-634C/G、IL-2Rβ-627C/T和IL-6-634C/G、AHSG6826C/T和TNF-α-1031T/C、TGF-β1-509T/C和IL-2Rβ-627C/T、IL-2Rβ-627C/T和AHSG6826C/T聯(lián)合基因型多態(tài)性與內(nèi)異癥發(fā)生無明顯關(guān)聯(lián)。
　　 3.內(nèi)異癥是一種多基因多