嗅球損傷對大鼠SVZ細(xì)胞增殖及其NMDA受體亞單位表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究成年雄性SD大鼠嗅球損傷后對SVZ細(xì)胞增殖及其NMDA受體亞單位表達(dá)的影響。
　　方法：正常成年雄性SD大鼠80只，體重250-300 g，隨機(jī)分為4組，即正常組、假手術(shù)組、單側(cè)損傷組、雙側(cè)損傷組。使用KOPF腦立體定位儀，直視打開嗅球上方顱骨，按Swanson大鼠腦圖譜取出嗅球，以明膠海綿充填于原嗅球部位制作嗅球損傷模型，術(shù)后分2W、4W、8W、12W四個時間點取腦。每個時間點的大鼠在處死前腹腔注射BrdU，給藥8次，

2、每次50mg/kg，每12h給1次，連續(xù)4d，動物繼續(xù)存活7d后分別灌注取腦。進(jìn)行石蠟切片，各組行免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry，IHC)染色觀察NMDA亞單位NR1、NR2A的變化，以及使用免疫熒光技術(shù)觀察神經(jīng)干細(xì)胞（Nestin標(biāo)記）、增殖細(xì)胞（Brdu標(biāo)記）。用ImagePro圖像處理與分析系統(tǒng)進(jìn)行光鏡下圖像分析。每組選取5張圖片，每張圖片選擇相同的面積進(jìn)行陽性細(xì)胞計數(shù)。
　　結(jié)果使用SPSS13.0

3、統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，多組間比較行單因素方差分析(one-way ANOVA)，各時間點之間使用單因素方差分析，方差齊采用LSD法，方差不齊采用Dunnett T3法，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：1.Nestin免疫熒光結(jié)果顯示，在嗅球損傷2W后陽性細(xì)胞數(shù)開始增加，單側(cè)損傷組、雙側(cè)損傷組較正常組和假手術(shù)組升高(P＜0.05);單側(cè)損傷組較雙側(cè)損傷組細(xì)胞數(shù)多(P＜0.0

4、5)，而正常組與假手術(shù)組陽性細(xì)胞數(shù)相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。到了4W后嗅球損傷組陽性細(xì)胞數(shù)達(dá)到最大值，單側(cè)損傷組、雙側(cè)損傷組較正常組和假手術(shù)組升高(P＜0.05);單側(cè)損傷組較雙側(cè)損傷組細(xì)胞數(shù)多（P＜0.05)，正常組與假手術(shù)組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。在8W和12W時陽性細(xì)胞在正常組水平，各組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2.BrdU免疫熒光結(jié)果顯示，2W后細(xì)胞數(shù)增加，嗅球損傷組與正常組和假手術(shù)

5、組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。在4W后，SVZ增殖細(xì)胞數(shù)達(dá)到最高峰，單側(cè)損傷組、雙側(cè)損傷組較正常組和假手術(shù)組升高(P＜0.05);單側(cè)損傷組較雙側(cè)損傷組陽性細(xì)胞數(shù)多(P＜0.05)，正常組與假手術(shù)組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。8W時細(xì)胞增殖速度緩慢下降，嗅球損傷組與正常組和假手術(shù)組相比增殖細(xì)胞較多（P＜0.05），但是單側(cè)損傷組與雙側(cè)損傷組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，12W時細(xì)胞增殖數(shù)在正常組水平，各組相比差異

6、無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。正常組和假手術(shù)組從2W到12W陽性細(xì)胞數(shù)均未見明顯改變。
　　3.免疫組織化學(xué)的結(jié)果顯示在嗅球損傷后大鼠各時間點SVZ中的細(xì)胞上均表達(dá)有NR1、NR2A; NR1與NR2A的表達(dá)呈現(xiàn)基本一致變化趨勢。嗅球損傷組可見NR1、NR2A在2W后陽性細(xì)胞數(shù)增長，嗅球損傷組與正常組和假手術(shù)組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，4W后細(xì)胞數(shù)上升到最大，單側(cè)損傷組、雙側(cè)損傷組較正常組和假手術(shù)組升高(P＜0.05)

7、;單側(cè)損傷組較雙側(cè)損傷組細(xì)胞數(shù)多(P＜0.05)，正常組與假手術(shù)組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。到了8W后細(xì)胞數(shù)迅速下降，嗅球損傷組與正常組和假手術(shù)組相比增殖細(xì)胞較多(P＜0.05)，但是單側(cè)損傷組與雙側(cè)損傷組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，12W后細(xì)胞數(shù)恢復(fù)至正常組水平(P＞0.05)。正常組和假手術(shù)組從2W到12W陽性細(xì)胞數(shù)均未見明顯改變。
　　結(jié)論：1.本研究結(jié)果顯示嗅球損傷后SVZ增殖細(xì)胞和神經(jīng)干細(xì)胞增加明顯，同