丙酮酸羧化酶缺陷對果蠅發(fā)育的影響及其分子機制的初步探討.pdf

1、p38信號通路在調(diào)控細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)過程中有著重要的作用，而MK2在外界條件刺激下可以被p38信號通路激活。我們通過熒光雙向凝膠電泳實驗發(fā)現(xiàn)，CG1516是MK2的作用底物。果蠅CG1516能編碼生成丙酮酸羧化酶，果蠅CG30010是一個功能未知的基因。在本實驗中，我們利用P-element轉(zhuǎn)座可以使目的基因進(jìn)行不精確剪切的原理得到了一株CG1516的突變體果蠅，并將其命名為CG1516Ex65，與此同時，我們還得到了一株CG30010的突

2、變體果蠅，我們將其命名為CG30010Ex41。這兩株突變體的表型是其純合突變體自交產(chǎn)生的幼蟲在其發(fā)育晚期死亡。
　　 在CG1516Ex65突變體中CG1516mRNA表達(dá)水平顯著降低，并且沒有檢測到CG1516蛋白質(zhì)的表達(dá);突變體CG30010Ex41中CG30010mRNA和CG1516蛋白質(zhì)表達(dá)水平顯著降低。因為p38和MK2突變體都有抗氧化缺陷，在我們得到的兩株純合突變體中，其抗氧化能力也都顯著下降。純合CG1516E

3、x65突變體果蠅中丙酮酸羧化酶活性降低。通過免疫熒光技術(shù)我們也觀察到了純合突變體果蠅胚胎中的丙酮酸羧化酶分布減少。通過在兩株突變體果蠅中都分別過表達(dá)CG1516和CG30010，我們發(fā)現(xiàn)CG1516Ex65純合突變體自交產(chǎn)生的幼蟲在其發(fā)育晚期死亡是由于其體內(nèi)丙酮酸羧化酶缺乏造成的。此外，我們還發(fā)現(xiàn)，CG1516和CG30010共定位于線粒體基質(zhì)，并且兩者在mRNA和蛋白質(zhì)水平上都有相互作用。
　　 因為果蠅丙酮酸羧化酶的氨基酸序