外周血免疫指標(biāo)與原發(fā)性肝癌微波消融預(yù)后的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景:全世界范圍內(nèi)腫瘤引起的死亡中,原發(fā)性肝癌是其中的第三大原因,在中國(guó)肝癌已成為第二大腫瘤致死原因,由于原發(fā)性肝癌血供豐富,腫瘤易于通過血液轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散至毗鄰和遠(yuǎn)隔器官,如何預(yù)測(cè)或發(fā)現(xiàn)原發(fā)性肝癌治療后的早期復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,是當(dāng)前肝癌防治領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。
　　非可控性炎癥與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切,炎癥微環(huán)境是腫瘤細(xì)胞和機(jī)體自身抗腫瘤免疫的主要戰(zhàn)場(chǎng),正常狀態(tài)下機(jī)體免疫系統(tǒng)可通過免疫監(jiān)視功能識(shí)別和清除發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的細(xì)胞,然而免疫監(jiān)視

2、作用有一定的限度,且腫瘤細(xì)胞可以通過分泌抑制性細(xì)胞因子,誘導(dǎo)抑制性免疫細(xì)胞的產(chǎn)生等機(jī)制來抑制機(jī)體的免疫應(yīng)答反應(yīng),進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。大部分原發(fā)性肝癌患者具有長(zhǎng)期的慢性病毒性肝炎以及肝硬化病史,由于肝臟慢性炎癥的長(zhǎng)期存在,大量殺傷性 T細(xì)胞被耗竭,肝臟逐漸進(jìn)入免疫抑制狀態(tài)。原發(fā)性肝癌患者外周血循環(huán)中的免疫細(xì)胞諸如骨髓來源抑制細(xì)胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC),表達(dá)Tie2的單核細(xì)胞(Tie

3、2-expressing monocytes,TEMs)和血清中表達(dá)的大量炎癥細(xì)胞因子都可以反映肝癌患者的免疫狀態(tài),有作為診斷原發(fā)性肝癌和檢測(cè)治療后復(fù)發(fā)的無創(chuàng)性標(biāo)志物的潛在應(yīng)用價(jià)值,可為微波消融聯(lián)合過繼性免疫方法治療原發(fā)性肝癌提供臨床指導(dǎo)。
　　方法:第一部分,前瞻性入組2012年9月至2013年12月擬接受微波消融或經(jīng)動(dòng)脈化療栓塞(TACE)治療的原發(fā)性肝癌患者85例,治療前根據(jù)腫瘤進(jìn)展情況分為早期肝癌組和進(jìn)展期肝癌組,并設(shè)置2

4、0名健康對(duì)照組,利用流式細(xì)胞學(xué)方法檢測(cè)外周血中MDSC、TEMs的比例,比較各組之間上述免疫細(xì)胞的比例有無差異;利用流式細(xì)胞微球芯片捕獲技術(shù)檢測(cè)血清中Th1、Th2、Th9、Th17、Th22相關(guān)細(xì)胞因子的濃度,并比較各組之間上述細(xì)胞因子表達(dá)水平有無差異。
　　第二部分,前瞻性入組2012年9月至2013年12月接受微波消融的早期原發(fā)性肝癌患者45例,微波消融前采用流式細(xì)胞學(xué)方法檢測(cè)外周血MDSC、TEMs的比例;采用流式細(xì)胞微球

5、芯片捕獲技術(shù)檢測(cè)血清中相關(guān)細(xì)胞因子的濃度?；颊唠S后接受微波消融治療,記錄患者臨床病理資料,隨訪獲得微波消融后肝內(nèi)復(fù)發(fā)情況。利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析45例原發(fā)性肝癌患者臨床病理資料、外周血MDSC比例、TEMs比例以及相關(guān)細(xì)胞因子水平與微波消融后肝內(nèi)復(fù)發(fā)之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:在本研究第一部分中,我們發(fā)現(xiàn)與健康對(duì)照組成人相比,原發(fā)性肝癌組患者外周血中MDSC的比例顯著增高,且進(jìn)展期肝癌組患者M(jìn)DSC的比例明顯高于早期肝癌組患者;與健康對(duì)照

6、組成人相比,原發(fā)性肝癌患者外周血中TEMs的比例顯著增高,進(jìn)展期肝癌組患者的TEMs比例高于早期肝癌組,但兩組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,進(jìn)展期肝癌組患者中伴有門靜脈癌栓組患者的外周血TEMs比例明顯高于不伴門靜脈癌栓組患者;與健康對(duì)照組成人相比,原發(fā)性肝癌患者血清中Th1相關(guān)細(xì)胞因子IL-12、IL-2、IFN-γ的濃度明顯升高,但進(jìn)展期肝癌組患者Th1相關(guān)細(xì)胞因子IL-12、IL-2、IFN-γ的濃度與早期肝癌組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;與健康對(duì)照組

7、成人相比,原發(fā)性肝癌患者血清中Th2相關(guān)細(xì)胞因子IL-4的水平顯著升高,且進(jìn)展期肝癌組患者的IL-4水平明顯高于早期肝癌組;與健康對(duì)照組成人相比,原發(fā)性肝癌患者血清中Th17相關(guān)細(xì)胞因子IL-17A的濃度明顯升高,且進(jìn)展期肝癌組患者的IL-17A表達(dá)水平明顯高于早期肝癌組;與健康對(duì)照組成人相比,原發(fā)性肝癌患者血清中Th22相關(guān)細(xì)胞因子IL-22的濃度明顯升高,且進(jìn)展期肝癌組病人的IL-22表達(dá)明顯高于早期肝癌組。我們初步選定外周血MDS

8、C比例、TEMs比例、血清IL-17A、IL-22濃度作為第二部分研究的主要指標(biāo)。
　　在本研究第二部分中,我們根據(jù)45例早期肝癌患者治療前外周血中MDSC、TEMs的比例、血清中IL-17A、IL-22的水平和隨訪獲得的肝內(nèi)復(fù)發(fā)情況繪制受試者工作特征曲線(ROC),確定了上述檢測(cè)指標(biāo)預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)的臨界值,分別為外周血MDSC比例(12.45％)、外周血TEMs比例(15.15%),血清IL-17A濃度(12.77pg/ml)、血清I

9、L-22濃度(85.54pg/ml),對(duì)45例原發(fā)性肝癌患者的臨床病理特征和上述四項(xiàng)免疫指標(biāo)與微波消融治療后肝內(nèi)復(fù)發(fā)情況進(jìn)行了單因素分析,其中AFP≥20ng/ml(P=0.023)、腫瘤Edmondson-Steiner分級(jí) III-IV級(jí)(P=0.002)、外周血TEMs比例≥15.15%(P<0.0001)、IL-22≥85.54pg/ml(P<0.0001)與微波消融后復(fù)發(fā)相關(guān)。將上述指標(biāo)應(yīng)用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行多因素分析,結(jié)

10、果發(fā)現(xiàn)原發(fā)性肝癌患者外周血TEMs比例≥15.15%(P=0.003)、血清IL-22≥85.54pg/m(P=0.011)是影響微波消融術(shù)后肝內(nèi)復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
　　結(jié)論:通過對(duì)20例健康對(duì)照組成人和85例不同進(jìn)展階段的原發(fā)性肝癌患者外周血MDSC、TEMs比例以及血清中相關(guān)細(xì)胞因子水平的檢測(cè),初步篩選出可能與肝癌發(fā)生、發(fā)展有關(guān)的四種免疫指標(biāo),即外周血MDSC比例、TEMs比例、血清IL-17A、IL-22濃度;對(duì)45例接受