食管癌組織中CRKL和Ki67的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、目的:食管癌(Esophageal cancer，EC)是一種常見的消化道惡性腫瘤，因病死率高、治療效果差而位于肺癌、胃癌、肝癌之后的第四位惡性腫瘤。其發(fā)病因素復(fù)雜，包括:吸煙、飲酒、感染、吃過熱食物、食管反流病、遺傳因素等，尋找一種確切的食管癌生物學(xué)標(biāo)記物和分子治療靶點具有重大意義。
　　細(xì)胞信號傳導(dǎo)是細(xì)胞將外界刺激通過胞膜及胞內(nèi)受體傳導(dǎo)到細(xì)胞內(nèi)部從而引起細(xì)胞相應(yīng)反應(yīng)的過程，與細(xì)胞的各種生理及病理現(xiàn)象有密切關(guān)系。細(xì)胞增殖是細(xì)胞的

2、一種不斷更新與變化的過程，腫瘤在發(fā)生、發(fā)展時期細(xì)胞增殖旺盛，是腫瘤的一個顯著特點。體內(nèi)多種信號通路能引起細(xì)胞正常與異常增殖情況。因此對于細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路中關(guān)鍵位點的研究成為目前在腫瘤機(jī)制及治療方面的熱點。
　　CRKL(Chicken Tumor virus10 regulator of kinase like protein)又稱CT10激酶調(diào)節(jié)子樣蛋白，是一種由CRKL基因編碼的信號接頭蛋白，本身不具有酶的活性，但能通過其結(jié)合

3、域與不同信號傳導(dǎo)途徑中的上、下游蛋白相結(jié)合，從而起到調(diào)控細(xì)胞信號輸出的作用，對細(xì)胞及機(jī)體內(nèi)的生理及病理過程中起著重要影響，其功能包括調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、粘附、運動、吞噬、分化、轉(zhuǎn)化和凋亡等。國內(nèi)外大量研究表明，CRKL在多種惡性腫瘤中呈現(xiàn)基因擴(kuò)增與蛋白高表達(dá)現(xiàn)象，并引起腫瘤細(xì)胞增殖，結(jié)合臨床病理參數(shù)進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)其與腫瘤的分化、分期、浸潤程度、轉(zhuǎn)移及預(yù)后有關(guān)，因此可認(rèn)為CRKL參與了多種惡性腫瘤的發(fā)生及發(fā)展過程。Ki67蛋白是一種與細(xì)胞有絲分裂

4、相關(guān)的蛋白質(zhì)，與細(xì)胞增殖密切相關(guān)，是反映腫瘤細(xì)胞增殖活性的公認(rèn)標(biāo)記物，在多種腫瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)，對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、分期、浸潤、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)和預(yù)后等具有重要影響。
　　本研究我們通過檢測CRKL基因和蛋白在食管癌組織及癌旁正常組織中的表達(dá)情況，并結(jié)合臨床病理參數(shù)進(jìn)行分析，探討CRKL與食管癌發(fā)病及病情進(jìn)展之間的關(guān)系;同時檢測Ki67蛋白在相應(yīng)食管癌組織及癌旁正常組織中的表達(dá)情況，并結(jié)合臨床病理參數(shù)進(jìn)行分析，探討Ki67與食管癌發(fā)病及病

5、情進(jìn)展之間的關(guān)系;我們還分析CRKL蛋白與Ki67蛋白在食管癌組織中表達(dá)的關(guān)系，進(jìn)一步探尋CRKL聯(lián)合Ki67在食管癌中表達(dá)的意義。
　　方法:采用SYBR Green實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real timefluorescent quantitative polymerase chain reaction)方法分別檢測20例食管癌和20例癌旁5cm以上正常食管組織中CRKLmRNA的表達(dá)情況，應(yīng)用免疫組化鏈霉素抗生物素抗生

6、物素-過氧化物酶(streptavidin peroxidase，SP)法分別檢測60例食管癌組織和56例癌旁5cm以上正常食管組織中CRKL及Ki67蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1 CRKLmRNA在食管癌組織及癌旁正常組織中表達(dá)情況
　　食管癌組織中CRKLmRNA的表達(dá)量是(11.275±1.050)，癌旁正常組織中的CRKLmRNA的表達(dá)量是(0.975±0.278)，食管癌組織中的CRKLmRNA的表達(dá)明

7、顯高于癌旁正常組織中的CRKLmRNA的表達(dá)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。
　　2 CRKL和Ki67蛋白在食管癌組織及癌旁正常組織中表達(dá)情況和與臨床病理參數(shù)的關(guān)系
　　CRKL蛋白在食管癌中陽性表達(dá)率為56.7％(34/60)，明顯高于正常食管癌旁組織中陽性表達(dá)率5.4％(3/56)(P＜0.01);其表達(dá)與食管癌分化程度(P=0.001)、TMN分期(P=0.029)、浸潤深度(P=0.049)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=

8、0.012)有關(guān)，與患者年齡、性別、腫瘤大小、部位無關(guān)(P＞0.05)。Ki67蛋白在食管癌中陽性表達(dá)率為68.3％(41/60)，明顯高于正常食管癌旁組織9.1％(5/56)(P＜0.01);其表達(dá)與腫瘤的TMN分期(P=0.006)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.028)有關(guān)，但與患者年齡、性別、腫瘤大小、部位、分化程度、浸潤深度無關(guān)(P＞0.05）。
　　3食管癌組織中CRKL和Ki67蛋白表達(dá)強(qiáng)度與病理參數(shù)的關(guān)系
　　CRKL

9、蛋白的表達(dá)強(qiáng)度與食管癌分化程度、TMN分期、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)。Ki67蛋白表達(dá)強(qiáng)度與食管癌的TMN分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)。
　　4 CRKL和Ki67蛋白在食管癌組織中的表達(dá)關(guān)系
　　在26例CRKL陰性表達(dá)的食管癌組織中，Ki67陰性12例，陽性+7例，陽性++5例，陽性+++2例;在7例CRKL陽性+表達(dá)的食管癌組織中，Ki67陰性3例，陽性+2例，陽性++1例，陽性+++1例;在1

10、8例CRKL陽性++表達(dá)的食管癌組織中，Ki67陰性2例，陽性+1例，陽性++9例，陽性+++6例;在9例CRKL陽性+表達(dá)的食管癌組織中，Ki67陰性2例，陽性+3例，陽性++2例，陽性+++2例。CRKL蛋白與Ki67蛋白在食管癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.352，P=0.006)。
　　結(jié)論:
　　1 CRKL基因及蛋白和Ki67蛋白在食管癌組織中均呈高表達(dá)，提示CRKL和Ki67與食管癌的發(fā)病有關(guān)。
　　2