PTEN與Ki67在膠質(zhì)瘤中的表達及臨床意義.pdf

1、目的：PTEN是一種抑癌基因，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的第一個具有磷酸酶活性的抑癌基因，對細胞增殖起負性調(diào)控作用。Ki67是一種與細胞增殖密切相關(guān)的核抗原，是應(yīng)用最廣泛的增殖細胞標(biāo)記之一。二者的表達異常與腫瘤的生物學(xué)行為密切相關(guān)。本課題目的為明確PTEN和Ki67與膠質(zhì)瘤惡性程度的關(guān)系，以及二者之間的相關(guān)情況，從而進一步探討PTEN的作用機制，并提出其對臨床工作的指導(dǎo)意義。 方法 一、標(biāo)本來源 收集從2003年12月1日到

2、2005年11月30日中國醫(yī)科大學(xué)盛京醫(yī)院神經(jīng)外科手術(shù)切除之膠質(zhì)瘤標(biāo)本40例，同時收集該科室同期因重度顱腦外傷行內(nèi)減壓而切除的腦組織作為正常腦組織，共計10例。所有腫瘤標(biāo)本均按照WHO于2000年制定的神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)重新確定病理診斷及分級。 二、免疫組化染色方法全部標(biāo)本經(jīng)甲醛固定和石蠟包埋后，進行免疫組織化學(xué)染色，檢測PTEN、Ki67的表達。具體步驟如下：首先將石蠟標(biāo)本制成5微米厚切片，常規(guī)二甲苯脫蠟、酒精脫水后，切片浸

3、入3％H<,2>O<,2>溶液中，室溫下孵育10分鐘，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性。切片浸入0.01M枸櫞酸溶液(PH=6.0)中，用500W微波爐加熱進行抗原修復(fù)10分鐘。切片滴加正常二抗動物血清封閉，室溫下孵育10分鐘，消除非特異性反應(yīng)。切片滴加PTEN和Ki67單克隆抗體，在室溫下靜置1小時，然后滴加生物素標(biāo)記的二抗，室溫下孵育1小時。應(yīng)用超敏SP試劑盒，按照S-P法常規(guī)顯色。最后用蘇木素復(fù)染切片。 三、結(jié)果判定

4、PTEN蛋白多表達于胞漿，陽性結(jié)果以細胞漿出現(xiàn)明顯棕黃色顆粒為準(zhǔn)；ki-67表達位于細胞核，陽性結(jié)果以細胞核出現(xiàn)明顯棕黃色顆粒為準(zhǔn)。每張切片隨機計數(shù)10個高倍鏡視野，計算瘤細胞染色陽性百分率，取均值作為PTEN和ki-67的陽性百分率。 四、統(tǒng)計學(xué)分析方法統(tǒng)計分析采用統(tǒng)計學(xué)軟件包SPSS11.5進行統(tǒng)計學(xué)分析。各組之間率的比較采用x<'2>檢驗，當(dāng)例數(shù)少于40時，采用Fisher精確概率法檢驗，采用spearman相關(guān)系數(shù)r分析

5、PTEN與ki-67表達之間的關(guān)系。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果 PTEN在全部50例標(biāo)本中均有不同程度的表達。在非腫瘤腦組織和膠質(zhì)瘤之間、高分化組(I-Ⅱ)與低分化組(Ⅱ-IV)之間，PTEN的表達程度均有顯著性差異(P<0.05)。 Ki67在正常腦組織中無表達，在I-Ⅱ級膠質(zhì)瘤中陽性率顯著低于Ⅲ-IV級膠質(zhì)瘤中的陽性率。 結(jié)果顯示，PTEN的表達強度隨病理級別增高呈下降趨勢，而Ki67的

6、表達強度隨病理級別增高呈上升趨勢，二者之間呈明顯的負相關(guān)(r=-1.00，P<0.05)。 討論 根據(jù)世界衛(wèi)生組織1992年的統(tǒng)計，隨地區(qū)和種族不同，原發(fā)性腦腫瘤(包括良性和惡性)的年發(fā)病率為2-19/10萬人，在所有的原發(fā)性腦腫瘤中約40％-50％為膠質(zhì)細胞瘤。由于膠質(zhì)瘤多呈浸潤性生長，所以治療十分困難。如何提高惡性腦腫瘤特別是膠質(zhì)瘤的治療效果，是擺在我們面前的艱巨任務(wù)。 近年來分子生物學(xué)的研究認為膠質(zhì)瘤的發(fā)生

7、及惡性進展與基因的異常密切相關(guān)，包括原癌基因的激活及過表達；抑癌基因的缺失、突變失活；細胞增殖和凋亡失衡等多基因參與、多步驟演變的過程，并由此認為腫瘤是基因的疾病。腫瘤的特征性表現(xiàn)形式為不受控制的細胞增殖，并缺乏起源組織的生化特征，現(xiàn)代的轉(zhuǎn)化論認為這一過程是多基因變異累積的結(jié)果，每一種變異都有助于腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化。抑癌基因在正常情況下可抑制細胞的過度生長，抑制細胞向惡性表型轉(zhuǎn)化。 若缺乏有功能的抑癌基因編碼蛋白，常會使細胞失去正常

8、的生長抑制調(diào)控機制，轉(zhuǎn)為惡性增殖狀態(tài)。 PTEN是1997年發(fā)現(xiàn)的定位于第10號染色體的抑癌基因，PTEN是一個與張力蛋白和輔助蛋白高度同源的磷酸酶。該基因是迄今為止發(fā)現(xiàn)的第一個具有磷酸酶活性的抑癌基因，在多種人類惡性腫瘤中均有不同程度的變異失活。研究表明，在膠質(zhì)母細胞瘤中，最常見的基因改變是10號染色體。PTEN的突變?nèi)笔c多形性膠質(zhì)母細胞瘤、高度惡性前列腺癌、卵巢癌等多種惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。 大量的研究結(jié)果表明P

9、TEN具有雙重特異性磷酸酶活性，它的抑癌作用主要是依靠其脂質(zhì)磷酸酶活性來完成的。PTEN通過使PIP3去磷酸化影響P13K-AKT2通路，阻止細胞生長及促進細胞凋亡；通過影響整合素介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)通路對FAK去磷酸化，從而抑制細胞轉(zhuǎn)移和浸潤等，抑癌基因PTEN的缺失突變已經(jīng)被證實是膠質(zhì)瘤惡性進展中重要的分子事件之一。 腫瘤增殖活性的檢測對于判斷腫瘤的惡性程度，預(yù)見其生物學(xué)行為，評估預(yù)后及選擇適當(dāng)?shù)闹委煷胧┦呛苤匾?。Ki67是一種

10、與細胞增殖密切相關(guān)的核抗原，存在于細胞周期的G1后期、S、G2、M期，是應(yīng)用最廣泛的增殖細胞標(biāo)記之一。 近年來，PTEN與Ki67已經(jīng)被各個領(lǐng)域的專家學(xué)者進行了多方面的檢測及深入廣泛的研究，并取得了大量成果。但是，將二者結(jié)合起來，研究其在膠質(zhì)瘤中的表達來得出相應(yīng)結(jié)論，目前尚不多見。本課題利用免疫組化方法，通過聯(lián)合檢測PTEN與Ki67在不同級別膠質(zhì)瘤中的表達水平，研究它們與膠質(zhì)瘤惡性程度之間的關(guān)系，以及二者之間的相關(guān)情況，以期進

11、一步探討PTEN的作用機制，并為明確腫瘤的發(fā)病機制和指導(dǎo)臨床治療提供強有力的理論和實驗依據(jù)。 結(jié)論 本實驗結(jié)果顯示：PTEN的表達強度隨病理級別增高呈下降趨勢，而Ki67的表達強度隨病理級別增高呈上升趨勢，二者之間呈明顯的負相關(guān)(r=0.01，P<0.05)，提示PTEN與細胞的增殖密切相關(guān)，它可通過下調(diào)細胞增殖信號通路抑制細胞的增殖<'[1]>，而達到抑制腫瘤的作用，這對于膠質(zhì)瘤基因治療中靶基因的選擇具有非常重要的臨床