大鼠Nor-1在大腸桿菌中的高效表達、抗體制備與功能研究.pdf

1、為探索Nor-1在神經元中的功能及作用機制,我們首先必須明確其在神經元損傷過程中蛋白表達的情況,因此作為工具抗NOR-1抗體的制備是必須的.為此,我們運用原核基因融合表達系統(tǒng)表達Nor-1的部分蛋白,以此作為抗原制備抗NOR-1多克隆抗體;使用這種抗體檢測Nor-1在小腦顆粒神經元低鉀誘導的凋亡模型及缺氧模型中蛋白的表達情況,并在模型中給予forskolin、MK801和海洋甾體YC-1這些神經元保護藥物,觀察Nor-1的表達與神經保護

2、及與神經元存活的關系.我們發(fā)現(xiàn),這些藥物在神經元損傷模型中促神經元存活的同時,誘導Nor-1蛋白的表達上調,提示Nor-1可能參與這些藥物促神經元存活作用的信號轉遞.這些藥物的神經元保護作用機制的研究已經較為深入,而我們的實驗為這些藥物的神經保護機制的研究提供了新的線索和思路.抗NOR-1多克隆抗體的獲得為Nor-1的生物學功能研究奠定了良好的基礎.作為新的促神經元存活的基因,明確Nor-1在小腦顆粒神經元損傷模型中蛋白表達的情況為探索

3、新的神經元保護信號轉導通路打下基礎.第一章大鼠Nor-1在大腸桿菌中高效表達及其抗體的制備選取Nor-1中能表達較好特異性及免疫原性蛋白的一段基因,構建其原核表達系統(tǒng),在大腸桿菌中高效表達GST-NOR-1融合蛋白并以此制備抗NOR-1的特異性抗體.第二章Nor-1在小腦顆粒神經元損傷模型中表達的研究利用制備的抗NOR-1多克隆抗體探討Nor-1在低鉀誘導小腦顆粒神經元凋亡模型及小腦顆粒神經元缺氧模型中的表達情況,分別加入forskol