豬瘟病毒E0蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)及其單克隆抗體的制備.pdf

1、豬瘟(Classical swine fever,CSF)是由豬瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一種以高熱、出血、死亡率高為特征的高度接觸性傳染病，是世界糧農(nóng)組織和各國政府嚴(yán)密監(jiān)控和檢疫的主要傳染病之一。CSFV屬于黃病毒科瘟病毒屬，單股正鏈RNA病毒。病毒粒子呈圓形，大小38~44 nm，核衣殼是立體對稱二十面體，由結(jié)構(gòu)蛋白C，E0，E1，E2和非結(jié)構(gòu)蛋白Npro，P7，NS2， NS3

2、，NS4A，NS4B，NS5A，NS5B構(gòu)成的。其中，E0糖蛋白既是一種包膜蛋白，又是一種核酸酶，它的活性與病毒在宿主體內(nèi)的持續(xù)感染有直接的關(guān)系，可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，也是病毒進(jìn)入敏感細(xì)胞的必須蛋白。
　　本試驗旨在利用原核表達(dá)系統(tǒng)，高效表達(dá)可產(chǎn)生中和性抗體的E0蛋白，并研究表達(dá)蛋白的免疫效果，初步研制快速ELISA豬瘟抗體診斷試劑盒。本試驗將豬瘟病毒 E0蛋白在大腸桿菌 BL21(DE3)表達(dá)，成功獲得了可溶性表達(dá)的 E0蛋白

3、，純化后的E0蛋白的濃度為0.332 mg/mL。表達(dá)的最佳條件是：IPTG0.1 mM，溫度為20℃，時間為18 h時，對E0蛋白Western Blot分析，發(fā)現(xiàn)E0蛋白在31KDa的位置發(fā)生了明顯的顯色反應(yīng)，能被豬瘟陽性血清特異性地識別，說明表達(dá)的可溶性E0蛋白具有良好的反應(yīng)原性。將E0蛋白作為診斷抗原，確立了抗原的最佳包被濃度為20μg/mL，血清的最佳稀釋度為1：800。
　　制備了抗豬瘟病毒E0蛋白的單克隆抗體，用E0