納米粒子介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)在心梗后促血管重建的應(yīng)用研究.pdf

1、本文采用由非病毒載體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因方法，即用包載pVEGF<,165>的聚乳酸-乙醇酸(PLGA)納米粒子進(jìn)行心梗后治療性血管再生的基因治療。首先在體外對(duì)原代培養(yǎng)的新生大鼠心肌細(xì)胞進(jìn)行了轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，通過對(duì)轉(zhuǎn)染細(xì)胞熒光顯微鏡下的觀察及VEGFl6~nRNA表達(dá)的特異性檢測(cè)，驗(yàn)證了pVEGF-PLGA納米粒子介導(dǎo)心肌組織轉(zhuǎn)基因的可行性，并對(duì)納米粒子的緩釋效果初步的評(píng)估；其次制備大鼠心梗模型，以此為心肌缺血的研究平臺(tái)，通過心肌內(nèi)直接注射的方式進(jìn)行

2、pVEGF-PLGA納米粒子介導(dǎo)基因治療的體內(nèi)研究，分別對(duì)pVEGF-PLGA納米粒子治療組及單純pVEGF質(zhì)粒、空載PLGA納米粒子對(duì)照組的治療效果進(jìn)行了綜合評(píng)估：(1)通過RT-PCR檢測(cè)了VEGF<,165> mRNA在缺血心肌組織的表達(dá)，證實(shí)納米粒子介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因的可行性及基因表達(dá)的持續(xù)性，并結(jié)合免疫組化分析了VEGF<,165>表達(dá)的組織分布及表達(dá)細(xì)胞類型；(2)通過組織特異性PCNA免疫組化分析評(píng)估pVEGF-PLGA納米粒子基

3、因治療促血管生成及維持新生血管存留、促進(jìn)其成熟的作用；(3)通過天狼猩紅染色、分析軟件定量分析，對(duì)比評(píng)估了各組心梗區(qū)及心梗交界區(qū)纖維化的狀況；(4)通過電鏡觀察探討納米轉(zhuǎn)基因的可能機(jī)制；(5)對(duì)pVEGF<,165>-PLGA納米粒子局部心肌注射是否能引起全身副反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)，評(píng)估pVEGF-PLGA納米粒子轉(zhuǎn)基因的安全性。綜合上述結(jié)果證實(shí)納米轉(zhuǎn)基因是一種安全有效的轉(zhuǎn)基因方式，pVEGF-PLGA納米粒子介導(dǎo)的基因治療能有效促進(jìn)心梗后缺血