PGD210轉(zhuǎn)染DC腫瘤疫苗的初步研究.pdf

1、目的:比較PGD210轉(zhuǎn)染的DC與未經(jīng)轉(zhuǎn)染的DC,刺激T細胞誘發(fā)免疫應答,有效激發(fā)T細胞并殺傷K562細胞的功能.編碼腫瘤特異性抗原(TSA)的基因PGD210導入DC的方法,為將來制成PGD210轉(zhuǎn)染DC疫苗用來治療慢性髓細胞白血病作一個前期的初步研究.方法:①用Dailey教授饋贈的PGD210質(zhì)粒轉(zhuǎn)入由DH5α搖菌后制備成的感受態(tài)細胞,經(jīng)少量提取的質(zhì)粒分別進行酶切鑒定和PCR鑒定的方法證實為PGD210質(zhì)粒,然后對其進行大量抽提.

2、②用電轉(zhuǎn)染的方法將大量抽提的PGD210質(zhì)粒轉(zhuǎn)入PBMNC誘生法制成的DC.用EGFP熒光質(zhì)粒作為同等條件電轉(zhuǎn)染的對照,并用RT-PCR鑒定PGD210質(zhì)粒轉(zhuǎn)入DC后轉(zhuǎn)錄的mRNA產(chǎn)物,證實電轉(zhuǎn)染成功.③用帶有PGD210質(zhì)粒的DC與未經(jīng)轉(zhuǎn)染的DC,分別刺激T細胞,再用流式細胞儀PI染色法比較殺傷K562細胞的功能.結(jié)果:①酶切鑒定和PCR鑒定的方法均證實為PGD210質(zhì)粒.②EGFP熒光質(zhì)粒作為同等條件電轉(zhuǎn)染的對照和RT-PCR鑒定均

3、證實PGD210質(zhì)粒通過電轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)入DC.③PGD210轉(zhuǎn)染的DC刺激T細胞(5:1,10:1,20:1)殺傷K562細胞的百分比分別是(26.1﹪,32.5﹪,39.7﹪),未經(jīng)轉(zhuǎn)染的DC刺激T細胞(5:1,10:1,20:1)殺傷K562細胞的百分比分別是(4.8﹪,14.4﹪,27.2﹪),spss檢測二者值比較有統(tǒng)計學差異.結(jié)論:PGD210轉(zhuǎn)染的DC刺激T細胞誘發(fā)免疫應答,有效激發(fā)T細胞并殺傷K562細胞的功能強于未經(jīng)轉(zhuǎn)染的DC