中波紫外線及Gad45α在皮膚鱗狀細胞癌發(fā)病中的作用研究.pdf

1、Gadd45α是細胞生長停滯與DNA損傷誘導蛋白45(Gadd45)家族成員之一,在細胞生長抑制、DNA損傷后誘導細胞凋亡及腫瘤抑制中具有重要作用,參與細胞生長的負性調(diào)控,瞬時轉(zhuǎn)染Gadd45α可誘導腫瘤細胞發(fā)生凋亡,具有維護基因組穩(wěn)定性的功能。有研究表明:Gadd45α是保護表皮不被紫外線誘導轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵因子,對上皮源性腫瘤中的原癌基因起負性調(diào)節(jié)作用。本課題通過誘導正常角質(zhì)形成細胞(HaCaT)及人表皮癌細胞株(A431)上調(diào)Gadd4

2、5α表達及對各細胞生物學行為的影響,初步探討Gadd45α在皮膚鱗狀細胞癌中的作用。
　　 1窄譜中波紫外線對HaCaT細胞Gadd45±表達及細胞增殖、凋亡的影響
　　 HaCaT細胞分別經(jīng)100mJ/cm2、200 mJ/cm2、400 mJ/cm2311nm NB—UVB照射后,應用半定量RT—PCR、western blot法檢測發(fā)現(xiàn):HaCaT細胞表達Gadd45α,隨照射劑量增加,Gadd45α mRNA及蛋

3、白表達升高;不同劑量311 nm NB—UVB照射后對HaCaT細胞有抑制作用,其抑制增殖作用呈量效及時效關(guān)系;照射后HaCaT細胞周期出現(xiàn)G2期阻滯,并促進細胞凋亡。
　　 2 HaCaT和M31細胞中6add45α表達差異
　　 應用RT—PCR、western blot及細胞免疫化學法檢測HaCaT和A431細胞Gadd45α表達。結(jié)果顯示:HaCaT細胞表達Gadd45α,Gadd45α表達在維持HaCaT細胞的

4、增殖和分化中可能有一定作用；A431細胞表達減弱,下調(diào)Gadd45α表達可能參與了其惡性生物學行為。
　　 3曲古菌素A對A431細胞Gadd45α表達及對細胞增殖、凋亡的影響
　　 應用不同濃度曲古菌素A處理A431細胞。結(jié)果顯示:曲古菌素A對細胞有抑制作用,其抑制增殖作用呈量效及時效關(guān)系；不同濃度曲古菌素A處理A431細胞后,細胞周期發(fā)生G1期阻滯,細胞凋亡增加；不同濃度曲古菌素A處理后,A431細胞Gadd45α

5、mRNA及蛋白表達升高。Gadd45α可能參與了A431細胞增殖抑制、周期阻滯,并可誘導細胞凋亡。
　　 4 Gadd45α蛋白在皮膚鱗狀細胞癌組織中的表達
　　 應用免疫組織化學方法檢測發(fā)現(xiàn):在高分化皮膚鱗狀細胞癌組,Gadd45α蛋白表達陽性表達率較中低分化組表達上調(diào)。
　　 以上研究結(jié)果說明:誘導HaCaT、A431細胞上調(diào)Gadd45α表達后均可抑制細胞增殖,6add45α可能參與了細胞周期阻滯并促進凋亡