中波紫外線及Gad45α在皮膚鱗狀細(xì)胞癌發(fā)病中的作用研究.pdf

1、Gadd45α是細(xì)胞生長停滯與DNA損傷誘導(dǎo)蛋白45(Gadd45)家族成員之一,在細(xì)胞生長抑制、DNA損傷后誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及腫瘤抑制中具有重要作用,參與細(xì)胞生長的負(fù)性調(diào)控,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染Gadd45α可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡,具有維護(hù)基因組穩(wěn)定性的功能。有研究表明:Gadd45α是保護(hù)表皮不被紫外線誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵因子,對(duì)上皮源性腫瘤中的原癌基因起負(fù)性調(diào)節(jié)作用。本課題通過誘導(dǎo)正常角質(zhì)形成細(xì)胞(HaCaT)及人表皮癌細(xì)胞株(A431)上調(diào)Gadd4

2、5α表達(dá)及對(duì)各細(xì)胞生物學(xué)行為的影響,初步探討Gadd45α在皮膚鱗狀細(xì)胞癌中的作用。
　　 1窄譜中波紫外線對(duì)HaCaT細(xì)胞Gadd45±表達(dá)及細(xì)胞增殖、凋亡的影響
　　 HaCaT細(xì)胞分別經(jīng)100mJ/cm2、200 mJ/cm2、400 mJ/cm2311nm NB—UVB照射后,應(yīng)用半定量RT—PCR、western blot法檢測發(fā)現(xiàn):HaCaT細(xì)胞表達(dá)Gadd45α,隨照射劑量增加,Gadd45α mRNA及蛋

3、白表達(dá)升高;不同劑量311 nm NB—UVB照射后對(duì)HaCaT細(xì)胞有抑制作用,其抑制增殖作用呈量效及時(shí)效關(guān)系;照射后HaCaT細(xì)胞周期出現(xiàn)G2期阻滯,并促進(jìn)細(xì)胞凋亡。
　　 2 HaCaT和M31細(xì)胞中6add45α表達(dá)差異
　　 應(yīng)用RT—PCR、western blot及細(xì)胞免疫化學(xué)法檢測HaCaT和A431細(xì)胞Gadd45α表達(dá)。結(jié)果顯示:HaCaT細(xì)胞表達(dá)Gadd45α,Gadd45α表達(dá)在維持HaCaT細(xì)胞的

4、增殖和分化中可能有一定作用；A431細(xì)胞表達(dá)減弱,下調(diào)Gadd45α表達(dá)可能參與了其惡性生物學(xué)行為。
　　 3曲古菌素A對(duì)A431細(xì)胞Gadd45α表達(dá)及對(duì)細(xì)胞增殖、凋亡的影響
　　 應(yīng)用不同濃度曲古菌素A處理A431細(xì)胞。結(jié)果顯示:曲古菌素A對(duì)細(xì)胞有抑制作用,其抑制增殖作用呈量效及時(shí)效關(guān)系；不同濃度曲古菌素A處理A431細(xì)胞后,細(xì)胞周期發(fā)生G1期阻滯,細(xì)胞凋亡增加；不同濃度曲古菌素A處理后,A431細(xì)胞Gadd45α

5、mRNA及蛋白表達(dá)升高。Gadd45α可能參與了A431細(xì)胞增殖抑制、周期阻滯,并可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
　　 4 Gadd45α蛋白在皮膚鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)
　　 應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測發(fā)現(xiàn):在高分化皮膚鱗狀細(xì)胞癌組,Gadd45α蛋白表達(dá)陽性表達(dá)率較中低分化組表達(dá)上調(diào)。
　　 以上研究結(jié)果說明:誘導(dǎo)HaCaT、A431細(xì)胞上調(diào)Gadd45α表達(dá)后均可抑制細(xì)胞增殖,6add45α可能參與了細(xì)胞周期阻滯并促進(jìn)凋亡