毛囊周期中毛囊周圍血管新生的變化以及VEGF表達(dá)的初步研究.pdf

1、目的：利用C57BL／6小鼠建立毛發(fā)生長(zhǎng)的動(dòng)物模型，研究小鼠毛囊周期中毛囊周圍微血管系統(tǒng)的變化、血管新生現(xiàn)象以及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的表達(dá)情況(變化)。 材料和方法： (1)取24只6～8周齡，皮色粉紅，毛發(fā)處于休止期的雌性C57BL／6小鼠，用松香／蠟(1：1)混合物脫毛誘導(dǎo)背部毛囊同步性進(jìn)入新的毛發(fā)生長(zhǎng)周期。 (2)分別于脫毛后的O，3，5，8，12，17，19，25天在緊靠皮膚平滑肌下方的皮下組織水

2、平切取小鼠背部皮膚(每個(gè)時(shí)點(diǎn)上三只小鼠)。部分組織制成石蠟切片，進(jìn)行抗CD31(顯示血管內(nèi)皮細(xì)胞)、抗VEGF免疫酶染色；部分組織制成冰凍切片，進(jìn)行抗CD31／Ki-67雙重免疫熒光標(biāo)記(顯示增殖性血管內(nèi)皮細(xì)胞)。 (3)利用MoticMed6．0CMIAS數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)和抗CD31染色小鼠皮膚切片，觀察、測(cè)量毛囊周圍微血管系統(tǒng)形態(tài)學(xué)上的變化(排列、血管直徑、微血管密度)；利用抗CD31／Ki-67雙重免疫熒光標(biāo)記的冰凍切

3、片，計(jì)數(shù)增殖性內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)；利用抗VEGF染色小鼠皮膚切片，觀察VEGF的表達(dá)部位(變化)。 (4)所有的統(tǒng)計(jì)分析在SPSS¨．5統(tǒng)計(jì)軟件上實(shí)現(xiàn)，P<0．05有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)果： (1)毛囊周圍的皮膚微血管系統(tǒng)在小鼠毛囊周期中有顯著的結(jié)構(gòu)變化。脫毛后0天(休止期)的血管主要位于真皮的近端和皮下組織中，且排列緊密，沿毛囊縱向走行的血管較少。相比之下，在脫毛后12天(生長(zhǎng)期Ⅵ亞期)沿毛囊縱向走行的血管很多。脫毛后0天

4、的血管內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞核小、扁平、狹長(zhǎng)，脫毛后12天的血管內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞核則較大、呈卵圓形。 (2)脫毛后O天與脫毛后12天相比較，后者皮下組織中的血管平均直徑較大(P<0．001)。 (3)微血管密度(MVD)自脫毛后O天(休止期)起一直增加，并且直到脫毛后25天(此時(shí)所有的毛囊都己進(jìn)入休止期)未見(jiàn)顯著下降。MVD在生長(zhǎng)期發(fā)展中不斷升高，尤以從生長(zhǎng)期II亞期(脫毛后3天)到生長(zhǎng)期Ⅳ亞期(脫毛后5天)明顯。 (4)大量

5、的增殖性內(nèi)皮細(xì)胞(PECs)只能在生長(zhǎng)期檢測(cè)到。在休止期(脫毛后0天)和生長(zhǎng)期早期(脫毛后3天)未見(jiàn)到PECs。生長(zhǎng)期Ⅳ亞期(脫毛后5天)到生長(zhǎng)期V亞期(脫毛后8天)PECs有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的增加(p<0．001)，而在生長(zhǎng)期V亞期(脫毛后8天)與生長(zhǎng)期Ⅵ亞期(脫毛后12天)之間(p<0．001)、生長(zhǎng)期Ⅵ亞期(脫毛后12天)與脫毛后17天(退行期)之間PECs有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的降低(p<0．001)。脫毛后17天(退行期)與生長(zhǎng)期Ⅳ亞期(

6、脫毛后5天)之間PECs數(shù)目沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的差別。 (5)在整個(gè)毛發(fā)生長(zhǎng)周期中真皮網(wǎng)狀層和皮下組織中的VEGF免疫活性主要位于毛囊外毛根鞘的上皮細(xì)胞，毛乳頭僅在生長(zhǎng)期的早期和中期產(chǎn)生VEGF。在毛發(fā)生長(zhǎng)周期中，許多真皮和皮下組織中的動(dòng)脈、細(xì)動(dòng)脈、毛細(xì)血管也具有VEGF免疫反應(yīng)性。 結(jié)論： (1)毛囊周期毛囊周圍的微血管系統(tǒng)結(jié)構(gòu)以及排列有顯著的變化。主要表現(xiàn)有：生長(zhǎng)期比休止期相比，毛囊間有更多的血管，血管內(nèi)皮細(xì)胞