一個水稻RING指蛋白基因OsBIRF1的分子鑒定.pdf

1、植物在與病原物的協(xié)同進(jìn)化過程中，逐漸形成了一系列復(fù)雜高效的保護機制來抵御病原物的侵染。植物中抗病基因所決定的抗病性是一種高水平的品種對病原菌小種的?；剐?。同時，植物還形成了一套適應(yīng)性更廣的可誘導(dǎo)的抗病機制。由于植物可誘導(dǎo)抗病性是一種非特異性的廣譜抗病性形式，因而倍受關(guān)注。在實驗室前期研究中，運用抑制性差減雜交法構(gòu)建了水稻誘導(dǎo)抗病性相關(guān)差別表達(dá)cDNA文庫，分離鑒定了200多個在誘導(dǎo)抗病性中差別表達(dá)的。cDNA克隆。同源性搜索發(fā)現(xiàn)，其中

2、一個差異表達(dá)片段BIHN-wl與已知其他生物的RING指蛋白具有較高程度的相似性。為探討這個可能的RING指蛋白的生物學(xué)功能以及在水稻抗病性中的作用，本研究克隆鑒定了這個基因的全長cDNA序列，命名為OsBIRF1(Oryza sativa L.BTH-induced RING finger protein 1)。 OsBIRF1基因全長cDNA為1873 bp，包含一個1191bp的ORF,編碼一個含396個氨基酸的蛋白，并含有RIN

3、G指蛋白所有的特征性保守結(jié)構(gòu)域。OsBIRF1基因位于水稻第2條染色體上，僅有一個外顯子，不含任何內(nèi)含子。 為了驗證所獲得的OsBIRF1基因編碼蛋白的生化功能，本研究將OsBIRF1編碼的ORF克隆進(jìn)原核表達(dá)載體pRSET-A，純化獲得重組的OsBIRF1融合蛋白。同時為了進(jìn)一步明確水稻OsBIRF1基因在植物抗病性中的作用，本文利用外源花椰菜花葉病毒組成型強表達(dá)啟動子CaMV35S與載體系統(tǒng)CHF3pp2p2l2構(gòu)建水稻Os

4、BIRF1基因的植物轉(zhuǎn)化雙元表達(dá)載體，通過根癌農(nóng)桿菌((Agrobacteriumtumefaciens)介導(dǎo)的葉盤轉(zhuǎn)化法將OsBIRF1基因轉(zhuǎn)化煙草，Kan+抗性和PCR篩選獲得9株轉(zhuǎn)OsBIRF1基因To代煙草植株。通過對這9株To代轉(zhuǎn)OsBIRF1基因煙草的觀察，發(fā)現(xiàn)一些轉(zhuǎn)基因植株與對照明顯不同的表型，有6株表現(xiàn)為頂芽雙生，占66.7;有2株表現(xiàn)為植株矮小，開的花結(jié)的果少，即繁殖能力下降，占22.2％.這些結(jié)果表明，OsBIRF1