緩激肽抑制TNF-α-ACTD誘導HLB-,2-G-,5-心肌細胞凋亡及其作用機制的研究.pdf

1、研究背景：激肽釋放酶－激肽系統(tǒng)（kallikrein/kinin system，KKS）是體內重要的調節(jié)系統(tǒng)，對心腦血管及腎臟有明顯的保護作用。KKS包括激肽釋放酶（kallikrein）、激肽原(kininogen)、激肽(kinin)、激肽BK1、BK2受體(bradykinin B1 receptor，bradykinin B2 receptor)和激肽酶(kininase)等幾種成分。激肽釋放酶是一種絲氨酸蛋白酶，可將低分子量的

2、激肽原分解釋放出有血管活性的激肽?，F(xiàn)已公認，緩激肽（bradykinin，BK）是生理條件下主要的激肽類物質，它通過與B2受體結合，激活了NO-cGMP，前列環(huán)素-cAMP等信號通路，發(fā)揮各種生物學效應，包括血管舒張，平滑肌的收縮與舒張，炎癥和疼痛等。HOE140是B2受體特異性的拮抗劑，可阻斷緩激肽的上述效應。近年的研究發(fā)現(xiàn)，KKS對于缺血再灌注損傷引起的心肌細胞凋亡有抑制作用，并可逆轉心肌重構和腎臟的纖維化。而對于TNF-a導致的心

3、肌細胞凋亡，KKS是否也有類似的保護作用，目前尚未見文獻報道。本實驗以HLB2G5心肌細胞系為研究對象，通過檢測細胞活性及細胞凋亡，探討了緩激肽對TNF-a誘導心肌細胞凋亡的影響，并初步研究了其中可能的信號機制。
　　 方法：在細胞培養(yǎng)基中分別加入緩激肽（100nmol/L），HOE140（1μmol/L）2h后，TNF-a（20ng/ml）與ACTD（200ng/ml）共同誘導HLB2G5心肌細胞凋亡。MTT法檢測TNF-a的

4、致凋亡效應，細胞形態(tài)學（APOPercentageTM Apoptosis Assay Kit及丫啶橙/溴化乙啶染色）和流式細胞儀計數觀察緩激肽對心肌細胞凋亡的影響。Western Blot方法檢測PI3K，p-AKT，Bcl-xL及Bax蛋白的表達水平。
　　 結果：TNF-a可聯(lián)合ACTD誘導HLB2G5心肌細胞的凋亡，其效應呈濃度依賴性和時間依賴性。APOPercentageTM Apoptosis Assay 及丫啶橙/

5、溴化乙啶染色的細胞形態(tài)學檢測均證明了緩激肽的抗凋亡效應。流式細胞計數顯示，加入緩激肽干預后，細胞凋亡數為（6.7±3）%，明顯少于溶媒組（10.4±4.3）％；而加入HOE140后，凋亡率又明顯上升，為（8.9±1.0）％。BK組與溶媒組的PI3K，p-AKT，Bax在蛋白質水平無明顯差異，對于Bcl-xL，BK組比溶媒組表達明顯升高。
　　 結論：緩激肽通過與B2受體結合，抑制TNF-a/ACTD誘導的HLB2G5心肌細胞凋亡