低溫貯藏下杏鮑菇的木質(zhì)化及關(guān)鍵酶基因的克隆與表達(dá)分析.pdf

1、杏鮑菇味道鮮美，具有極高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，有“平菇之王”之稱。在冷藏條件下，杏鮑菇會(huì)發(fā)生硬度上升、發(fā)綿、難以咀嚼等質(zhì)地劣變現(xiàn)象，導(dǎo)致失去杏鮑菇特有的脆嫩口感，并且會(huì)造成營(yíng)養(yǎng)成分含量的下降，嚴(yán)重影響杏鮑菇的貯藏品質(zhì)。本研究首次對(duì)低溫貯藏的杏鮑菇質(zhì)地變化特征進(jìn)行研究，探究引起杏鮑菇采后質(zhì)地劣變的原因，并通過克隆木質(zhì)素生物合成過程中相關(guān)酶的基因，分析這些基因在杏鮑菇木質(zhì)化過程中的表達(dá)水平，從分子水平上探討杏鮑菇采后木質(zhì)化的相關(guān)機(jī)理。主要結(jié)果如下：<

2、br>　?。?）低溫貯藏的杏鮑菇質(zhì)地變化特征
　　新鮮杏鮑菇，裝在低密度聚乙烯袋，分別存放在不同的低溫（2℃、4℃、8℃）下18天，測(cè)量其質(zhì)地性狀。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在整個(gè)貯藏期間杏鮑菇發(fā)生兩次增韌，并且木質(zhì)素含量與3個(gè)木質(zhì)素合成中關(guān)鍵酶活性變化高度相關(guān)。幾丁質(zhì)和纖維素含量與增韌表現(xiàn)出低相關(guān)性。我們的研究結(jié)果表明，增韌可能主要是由于木質(zhì)化，從而影響杏鮑菇的采后品質(zhì)。
　?。?）木質(zhì)素合成途徑關(guān)鍵酶基因的克隆
　　利用RT-PC

3、R、RACE等技術(shù)，成功從杏鮑菇中克隆得到了1條PAL基因的全長(zhǎng)序列，命名為PePal；以及4條4CL基因（分別命名為Pe4cl1、Pe4cl2、Pe4cl3、Pe4cl4）和1條POD基因（命名為PePod）的3’端部分序列。PePal全長(zhǎng)全長(zhǎng)2441的序列，包含1個(gè)29bp的5’端非編碼區(qū)，一個(gè)183bp的3’端非編碼區(qū)，一個(gè)2229bp的完整開放閱讀框（open reading frame，ORF），編碼743個(gè)氨基酸。Pe4cl

4、1基因片段cDNA長(zhǎng)度為1898bp，其中包括119bp的3’端非編碼區(qū)序列和1779bp編碼區(qū)序列，編碼區(qū)編碼了593個(gè)氨基酸。Pe4cl2基因片段cDNA長(zhǎng)度為1620bp，編碼了540個(gè)氨基酸。Pe4cl3基因片段cDNA長(zhǎng)度為1406bp，編碼了468個(gè)氨基酸。Pe4cl4基因片段cDNA長(zhǎng)度為1012bp，編碼了337個(gè)氨基酸。PePod基因片段cDNA長(zhǎng)度為754bp，其中包括109bp的3’端非編碼區(qū)序列和645bp編碼區(qū)

5、序列，編碼區(qū)編碼了215個(gè)氨基酸。
　?。?）杏鮑菇不同冷藏時(shí)期木質(zhì)素生物合成關(guān)鍵酶基因的表達(dá)特征
　　運(yùn)用熒光定量PCR（qRT-PCR)技術(shù)檢測(cè)了杏鮑菇不同冷藏時(shí)期木質(zhì)素生物合成關(guān)鍵基因的表達(dá)模式。熒光定量PCR結(jié)果顯示，在貯藏時(shí)間內(nèi)PePal、Pe4cl1、Pe4cl3基因具有相似的表達(dá)模式（升-降-升-降）。前12天貯藏期內(nèi)，不同貯藏溫度下 PePal、Pe4cl1、Pe4cl3和PePod基因表達(dá)水平曲線與PAL、