喉癌相關(guān)基因LCRG1抑瘤機(jī)制的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文喉癌相關(guān)基因LCRG1抑瘤機(jī)制的蛋白質(zhì)組學(xué)研究姓名：章曉鵬申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：病理生理腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：陳主初20050501墮堂生堡莖一一一』蘭!!!壁再采用比較蛋白質(zhì)組學(xué)方法識別和鑒定與LCRGl作用相關(guān)的差異表達(dá)蛋白質(zhì)；最后，利用磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)分析方法尋找與LCRGl作用相關(guān)的差異磷酸化蛋白質(zhì)。(一)LCRGl基因的抑瘤功能分析采用脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，將重組表達(dá)載體pcDNA31()／LCRGl和空白

2、載體pcDNA31()分別轉(zhuǎn)染喉癌細(xì)胞系Hep2，經(jīng)抗性藥物篩選和RTPCR驗(yàn)證獲得陽性細(xì)胞克隆，從而建立穩(wěn)讓高表達(dá)LCRGlmRNA的Hep一2細(xì)胞系(Hep一2／LCRGl)和載體對照組細(xì)胞系(Hep一2／pcDNA31())；通過繪制細(xì)胞生長曲線，平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、軟瓊脂集落形成試驗(yàn)和裸鼠致瘤實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步分析LCRGl基因的功能。結(jié)果顯示，Hep2／LCRGl細(xì)胞的生長速度和細(xì)胞增殖能力明顯降低，在軟瓊脂中形成的集落小、集落數(shù)少，

3、與載體對照組Hep2／pcDNA31()和空白對照組Hep2比較具有明顯差異(PO05)；Hep2／LCRGl細(xì)胞接種裸鼠后，與對照組比較，在接種部位長出腫塊的時(shí)間推遲；移植瘤體積明顯減小，瘤體重量也相對較輕(PO05)。這些結(jié)果說明LCRGl能夠降低喉癌細(xì)胞的惡性表型，具有抑瘤基因的重要特征。(二)Hep一2／LCRGl和Hep一2／pcDNA31()細(xì)胞的差異表達(dá)蛋白質(zhì)分析采用雙向凝膠電泳技術(shù)(two—dimensionalpoly