組織工程隆鼻法的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目前隆鼻充填材料應(yīng)用最廣泛的是固體硅橡膠、膨體聚四氟乙烯和自體肋軟骨等。自體肋軟骨效果最好，但其來源有限，需要另行手術(shù)切取。如果能夠克服傳統(tǒng)軟骨移植的不足，則在每年眾多的隆鼻術(shù)中，使用有生命力的軟骨組織做充填物是最佳的選擇。組織工程學(xué)的發(fā)展為此帶來了新的希望。 組織工程是應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)和工程學(xué)的原理，研究開發(fā)能夠修復(fù)、維持或改善損傷組織形態(tài)和功能的生物替代物的一門科學(xué)。軟骨組織工程是利用相應(yīng)的種子細(xì)胞與生物可降解材料在體外進(jìn)行培

2、植，從而得到具有生物活性的“人工軟骨”，其結(jié)構(gòu)、功能與自體軟骨相類似。軟骨組織工程的發(fā)展在軟骨缺損的修復(fù)過程中起到了積極作用，同時(shí)為整形美容專業(yè)充填材料的發(fā)展和改進(jìn)指明了新的方向。 組織工程技術(shù)包括：種子細(xì)胞的獲?。环N子細(xì)胞高效、均勻種植于三維支架，形成細(xì)胞—支架復(fù)合物，并進(jìn)行共同培養(yǎng)；組織工程軟骨的體外構(gòu)建及動(dòng)物在體實(shí)驗(yàn)觀察。本實(shí)驗(yàn)將兔的自體軟骨細(xì)胞分別種植于預(yù)先經(jīng)過膠原凝膠包埋的PHB及改性PHB(PHB-PLA共混物)三維

3、材料支架，形成軟骨細(xì)胞一可降解三維支架復(fù)合物，構(gòu)建組織工程軟骨，并做為隆鼻充填材料移植于兔鼻背骨膜下。在不同時(shí)間點(diǎn)，從大體、組織染色及掃描電鏡觀察組織工程軟骨的形成情況。 實(shí)驗(yàn)一以聚羥基丁酸已酯(PHB)為支架材料的組織工程隆鼻法的實(shí)驗(yàn)研究 目的：研究以聚羥基丁酸己酯(PHB)為支架材料構(gòu)建的組織工程軟骨做為隆鼻充填材料的可行性。方法：①采用酶消化法培養(yǎng)兔耳軟骨細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞傳代、純化、形態(tài)學(xué)觀察及鑒定。②PHB支架的制

4、備及預(yù)處理。③細(xì)胞在管形支架上種植、生長及支架材料降解的觀察。④細(xì)胞—支架復(fù)合物的體內(nèi)培養(yǎng)及觀察。⑤實(shí)驗(yàn)分組進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)組：取兔耳軟骨細(xì)胞，進(jìn)行體外培養(yǎng)擴(kuò)增，達(dá)到一定數(shù)量后，再接種于PHB支架上，置于新西蘭白兔的鼻背部骨膜下，從大體和組織學(xué)、掃描電鏡觀察軟骨形成情況；設(shè)空白對(duì)照組：單純以空白支架材料移植于兔鼻背骨膜下。兩組標(biāo)本均在相同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行檢測。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組：植入4周后，在兔鼻背下支架表層有軟骨層形成，并可見軟骨細(xì)胞突入至支架材料內(nèi)部

5、。8周后支架材料繼續(xù)降解，軟骨細(xì)胞及細(xì)胞基質(zhì)生成明顯，伴有少量膠原長入。對(duì)照組無相應(yīng)變化。結(jié)論：以聚羥基丁酸已酯(PHB)為支架材料構(gòu)建的組織工程軟骨可用于隆鼻的充填材料。 實(shí)驗(yàn)二PHB-PLA與兔耳軟骨細(xì)胞的相容性的實(shí)驗(yàn)研究目的：探討聚羥基丁酯—聚丙交酯復(fù)合物(PHB-PLA)與兔耳軟骨細(xì)胞的細(xì)胞相容性，為進(jìn)一步以其為支架，構(gòu)建組織工程軟骨提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。方法：分離、培養(yǎng)兔耳軟骨細(xì)胞，接種于PHB-PLA浸泡液及膜片上

6、，四甲基偶氮唑鹽法(MTT)測定細(xì)胞增殖指數(shù)及計(jì)算毒級(jí)；經(jīng)過體外培養(yǎng)后，行組織染色(Masson)及掃描電鏡觀察細(xì)胞的生長狀況。設(shè)立空白對(duì)照組：不含PHB-PLA浸泡液及膜片的新鮮培養(yǎng)基。結(jié)果：兔耳軟骨細(xì)胞在PHB-PLA浸泡培養(yǎng)基中生長良好。24h，48h，72hMTT法結(jié)果與對(duì)照組無顯著差異；毒性分級(jí)分0。組織染色及掃描電鏡顯示：兔耳軟骨細(xì)胞生長良好，形態(tài)正常，黏附牢固。結(jié)論：PHB-PLA與兔耳軟骨細(xì)胞的相容性良好，無毒性，可以進(jìn)

7、一步用于構(gòu)建組織工程軟骨。 實(shí)驗(yàn)三：以改性聚羥基丁酸已酯(PHB-PLA)做為支架的組織工程隆鼻法的實(shí)驗(yàn)研究目的：研究以聚羥基丁酸已酯與聚丙交酯共混(PHB-PLA)材料即改性聚羥基丁酸已酯(PHB)做為支架，構(gòu)建的組織工程軟骨做為隆鼻充填材料的可行性。方法：實(shí)驗(yàn)分組進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)組：取兔的耳軟骨細(xì)胞，體外培養(yǎng)擴(kuò)增達(dá)到一定數(shù)量后，接種于PHB-PLA支架，置于新西蘭白兔的鼻背部骨膜下，觀察軟骨形成情況；對(duì)照組：單純以未接種軟骨細(xì)胞的

8、支架移植于兔鼻背部骨膜下。兩組均于相同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行檢測。結(jié)果：該支架具有一定的韌性及彈性，可保持形狀無塌陷變形。細(xì)胞在支架材料上生長貼附良好，具有良好的生長活性。實(shí)驗(yàn)組：植入4周后在兔鼻背下支架內(nèi)有大量類軟骨組織形成，并可見軟骨細(xì)胞突入至支架材料內(nèi)部。8周后支架材料大量降解，殘余少量，軟骨細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)生成明顯。對(duì)照組無相應(yīng)變化。結(jié)論：以改性聚羥基丁酸已酯(PHB-PLA共混物)做為支架材料的組織工程軟骨是良好的隆鼻充填材料。