H9N2 AIV對(duì)肉雞腸道菌群和腸道組織緊密連接的影響.pdf

1、H9N2亞型禽流感病毒（H9N2 AIV）是一種低致病性禽流感病毒，其臨床癥狀表現(xiàn)溫和，易繼發(fā)細(xì)菌感染和支原體感染，對(duì)我國(guó)畜牧業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。H9N2 AIV感染肉雞引起機(jī)體免疫抑制，繼發(fā)感染細(xì)菌時(shí)常伴發(fā)胃腸道炎癥，但H9N2 AIV感染后對(duì)肉雞腸道菌群的影響仍未可知。本研究通過(guò)Illumina Hiseq2000測(cè)序技術(shù)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）的方法研究H9N2 AIV感染后肉雞腸道菌群結(jié)構(gòu)及其腸道粘膜組織緊密連接的變化

2、，為H9N2 AIV繼發(fā)感染的防控提供理論指導(dǎo)，為進(jìn)一步研發(fā)抗流感病毒的微生態(tài)制劑提供理論依據(jù)。
　　本研究對(duì)1株于2015年1月在河南某雞場(chǎng)分離到的H9N2 AIV（毒株HN/SH01/15）進(jìn)行純化，并測(cè)定分離株的毒價(jià)為106.13 EID50/0.1mL；通過(guò)系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)分析表明該分離株屬于H9.4.2.1亞分支，其與國(guó)內(nèi)疫苗毒株SH/F/98株之間的同源性達(dá)到89.4％，與GD/SS/94株之間的同源性是90.4%，與SD/

3、6/96株之間的同源性是89.8%。
　　本研究利用Illumina Hiseq2000測(cè)序平臺(tái)對(duì)感染SH01毒株的雞的回腸粘膜和盲腸粘膜菌群基因組DNA進(jìn)行16S rDNA宏基因組測(cè)序，以分析H9N2 AIV對(duì)肉雞腸道菌群的影響。
　　測(cè)序結(jié)果表明：
　　1）回腸菌群序列深度基本覆蓋樣品中所有的物種，滿足試驗(yàn)分析需要；
　　2）攻毒組均含特異Operational Taxonomic Unit（OTU）；

4、>　　3）感染H9N2 AIV后肉雞腸道菌群組成和各菌屬相對(duì)豐度發(fā)生了變化，且盲腸粘膜上缺少考拉桿菌屬，出現(xiàn)Sutterella。
　　本研究用qPCR方法對(duì)感染H9N2 AIV后肉雞回腸和盲腸粘膜埃希氏菌屬含菌量進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)一步驗(yàn)證16S rDNA宏基因組測(cè)序的結(jié)果。結(jié)果表明，與空白組相比，攻毒后第5天攻毒組埃希氏菌屬在回腸粘膜上增加（p<0.05），在盲腸粘膜上增加；攻毒后第12天埃希氏菌屬在回腸粘膜上減少（p<0.01），在

5、盲腸粘膜上減少。其變化的趨勢(shì)與Illumina宏基因組測(cè)序結(jié)果一致。
　　本研究用相對(duì)熒光定量PCR對(duì)感染H9N2 AIV后肉雞回腸和盲腸粘膜緊密連接進(jìn)行探究。結(jié)果表明：攻毒后第5天，回腸絨毛長(zhǎng)度顯著降低（p<0.05）；盲腸粘膜結(jié)構(gòu)蛋白ZO-1和Occludin極顯著下調(diào)（p<0.01）。攻毒后第12天，回腸隱窩顯著降低（p<0.05），絨毛長(zhǎng)度/隱窩深度顯著減少（p<0.05），Occludin mRNA表達(dá)量顯著下調(diào)（p<0