模擬微重力對肺淋巴細胞功能的影響及作用機制.pdf

1、目的：探討模擬微重力對肺T淋巴細胞功能的影響及作用機制。研究模擬微重力條件下，T淋巴細胞功能異常及與此功能密切相關(guān)的蛋白激酶C(PKC)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑、Ras/MEK/ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的變化機制；研究模擬微重力條件下，瘦素對T淋巴細胞功能的調(diào)節(jié)作用及兩條轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑變化機制。 方法：1.分離肺T淋巴細胞，利用的旋轉(zhuǎn)式細胞組織培養(yǎng)系統(tǒng)(RotaryCellCultureSystem，RCCS，即旋轉(zhuǎn)生物反應(yīng)器)模擬微重力條件，分別在普

2、通細胞培養(yǎng)容器組和旋轉(zhuǎn)生物反應(yīng)器培養(yǎng)T淋巴細胞；2.普通細胞培養(yǎng)容器組設(shè)4組，①對照組，②刀豆素蛋白A(ConA)組，③瘦素組，④ConA+瘦素組；旋轉(zhuǎn)生物反應(yīng)器設(shè)5組，①對照組，②ConA組，③瘦素組，④ConA+瘦素組，⑤ConA+12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA)組；3.采用PepTag非放射性PKC檢測試劑盒測定T淋巴細胞PKC活性；采用酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)(雙抗體夾心ELISA法)測定T淋巴細胞的白介素-2(IL-2)生成

3、；采用免疫組織化學(xué)染色觀察T淋巴細胞表達NF-κB、c-fos；采用流式細胞技術(shù)，檢測T淋巴細胞表面抗原CD25、CD71的表達；采四甲基偶氮唑藍(MTT)微量比色法測定T淋巴細胞的增殖反應(yīng)；蛋白印跡(Westernblot)法檢測T淋巴細胞磷酸化的ERK和總的ERK蛋白的表達。 結(jié)果：1.普通細胞培養(yǎng)容器組培養(yǎng)的T淋巴細胞，刀豆素蛋白A(ConA)組與對照組比較，T淋巴細胞PKC活性增強，IL-2生成增加，表面表達CD25、C

4、D71分子的細胞增多，NF-κB、c-fos的免疫組化染色陽性細胞的百分比增加，磷酸化的ERK蛋白量增加，而總的ERK蛋白量的不變，T淋巴細胞的增殖反應(yīng)增加(P＜0.01)；2.模擬微重力條件下，即旋轉(zhuǎn)生物反應(yīng)器培養(yǎng)的T淋巴細胞，與普通細胞培養(yǎng)容器培養(yǎng)的T淋巴細胞相比較，ConA刺激后，PKC活性減低，IL-2生成下降，表面表達CD25、CD71分子的細胞減少，NF-κB、c-fos免疫組化染色陽性細胞百分比減低，磷酸化的ERK蛋白量與

5、總的ERK蛋白量的比值降低，T淋巴細胞的增殖反應(yīng)也是降低的(P＜0.01)；3.模擬微重力條件下，加入PKC特異的激動劑PMA，和ConA共同培養(yǎng)的T淋巴細胞組，與同樣條件下ConA組相比，PKC活性略增強、IL-2生成的量、表面表達CD25、CD71分子的細胞數(shù)，NF-κB、c-fos的免疫組化染色陽性細胞百分比，磷酸化的ERK蛋白量與總的ERK蛋白量的比值，T淋巴細胞的增殖反應(yīng)均有所增加，但均不能達到普通細胞培養(yǎng)容器組中ConA組水

6、平；4.在普通細胞培養(yǎng)容器組，瘦素組與ConA組相比，上述所有指標(biāo)均降低的，而且有顯著性差異(P＜0.01)；在ConA+瘦素組，上述所有指標(biāo)均較ConA組升高；5.在模擬微重力條件下，瘦素組這些指標(biāo)與同樣培養(yǎng)條件下ConA組的相同指標(biāo)相比，無明顯變化，而且加入瘦素的ConA組，再與同樣培養(yǎng)條件下ConA組比較，仍無明顯變化。旋轉(zhuǎn)生物反應(yīng)器組中的ConA+瘦素組，與普通細胞培養(yǎng)容器組中的ConA+瘦素組相比較，上述指標(biāo)均降低，有顯著差異

7、(P＜0.01)；6.在模擬微重力條件下，不僅瘦素組還是ConA+瘦素組，上述所有指標(biāo)與同樣條件下的ConA+PMA組相比，上述所有指標(biāo)也是均降低的(P＜0.01)。 結(jié)論：1.模擬微重力條件下，T淋巴細胞的激活、增殖受到抑制；PKC的活性降低，表達NF-κB、c-fos細胞數(shù)減少，表面表達CD25、CD71分子的細胞數(shù)降低，T淋巴細胞分泌的IL-2降低，T淋巴細胞增殖能力下降，磷酸化的ERK1/ERK2的蛋白表達水平下降；2.