電針對腦缺血再灌注損傷小鼠凋亡蛋白Fas、Bcl-xL、P53的表達研究.pdf

1、目的：通過實驗研究，驗證電針（選用腎俞、膈俞、百會穴）治療血管性癡呆（VD）的療效，探討其治療作用機理。
　　 方法：
　　 第一部分電針對腦缺血再灌注損傷小鼠行為學(xué)的影響
　　 將健康雄性昆明小鼠隨機分為四組，假手術(shù)組、模型組、喜得鎮(zhèn)組、電針組。以阻斷雙側(cè)頸總動脈加尾部放血并重復(fù)腦缺血再灌注法復(fù)制模型，假手術(shù)組只行過程，不阻斷血流，尾部不放血。手術(shù)當(dāng)天動物蘇醒后，進行治療。電針組選取百會、腎俞、膈俞穴，毫針刺入

2、，接電針儀，連續(xù)波，頻率3次/秒。每次10min，每日1次。喜得鎮(zhèn)組灌胃喜得鎮(zhèn)0.77mg/kg/日。分別于治療后1天、7天，進行卒中指數(shù)評分和神經(jīng)病癥評分；于治療后7天，進行水迷宮實驗和跳臺實驗及電迷宮實驗檢測學(xué)習(xí)成績，次日檢測記憶成績。
　　 第二部分電針對腦缺血再灌注損傷小鼠海馬及皮層神經(jīng)元凋亡的影響
　　 分組、造模及治療方法均同第一部分，分別于治療后1天、7天隨機取3只，將視交叉至乳頭體組織以4％多聚甲醛固定，

3、石蠟包埋，冠狀切片，厚5um，每隔2張取1張。進行海馬及皮層神經(jīng)元原位細胞凋亡檢測（TUNEL）。
　　 第三部分電針對腦缺血再灌注損傷小鼠大腦皮層Fas、Bcl-xL、P53的影響
　　 分組、造模及治療方法均同第一部分。分別于治療后1天、7天取腦，分離雙側(cè)大腦皮層，70％乙醇固定，制備單細胞懸液，流式細胞術(shù)檢測皮層細胞Fas、Bcl-xL、P53蛋白表達。
　　 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS11.5軟件進行分析處理

4、。
　　 結(jié)果：
　　 第一部分電針對腦缺血再灌注損傷小鼠行為學(xué)的影響
　　 1、行為學(xué)評分結(jié)果
　　 術(shù)后1天，模型組卒中指數(shù)評分和神經(jīng)病癥評分明顯高于假手術(shù)組，電針治療可顯著降低行為學(xué)評分（P<0.01），而藥物喜得鎮(zhèn)對行為學(xué)評分無明顯改善（P>0.05）。術(shù)后7天，各組小鼠兩項行為學(xué)評分接近于假手術(shù)組，運動障礙完全恢復(fù)。
　　 2、學(xué)習(xí)、記憶成績檢測結(jié)果
　　 小鼠水迷宮實驗學(xué)習(xí)成績

5、與記憶成績結(jié)果相似，模型組的游全程時間顯著延長，錯誤次數(shù)明顯增加（均P<0.01），電針和喜得鎮(zhèn)治療均可縮短游全程時間，減少錯誤次數(shù)（P<0.01），但均以電針作用為優(yōu)（P<0.01）。
　　 小鼠跳臺實驗學(xué)習(xí)成績與記憶成績結(jié)果相似，模型組反應(yīng)時間顯著延長，潛伏期明顯縮短（均P<0.01）；電針和喜得鎮(zhèn)治療均可縮短反應(yīng)時間，延長潛伏期（P<0.01），且以電針作用為優(yōu)（P<0.01）。
　　 小鼠電迷宮實驗學(xué)習(xí)成績與記憶

6、成績結(jié)果相似，模型組反應(yīng)時間顯著延長，錯誤次數(shù)顯著增加（均P<0.01）；電針和喜得鎮(zhèn)治療均可縮短反應(yīng)時間，減少錯誤次數(shù)（P<0.01），且以電針作用為優(yōu)（P<0.01）。
　　 第二部分電針對腦缺血再灌注損傷小鼠海馬及皮層神經(jīng)元凋亡的影響
　　 假手術(shù)組海馬CA1區(qū)和皮層均無凋亡陽性細胞；術(shù)后1天，模型組可見凋亡陽性細胞，核固縮、呈棕黃色，神經(jīng)纖維排列紊亂；術(shù)后7天，海馬CA1區(qū)凋亡陽性細胞明顯增多，皮層可見大量凋亡細

7、胞，皮質(zhì)變薄，局限性神經(jīng)元丟失，呈篩網(wǎng)狀，淋巴細胞浸潤，膠質(zhì)細胞大量增生，出現(xiàn)梗塞灶；喜得鎮(zhèn)組、電針組僅出現(xiàn)少量或散在凋亡細胞。
　　 第三部分電針對腦缺血再灌注損傷小鼠大腦皮層Fas、Bcl-xL、P53的影響
　　 模型組術(shù)后1天，皮層Bcl-xL表達明顯下降（P<0.05），術(shù)后7天則顯著下降（P<0.01）。經(jīng)電針和喜得鎮(zhèn)治療1天和7天后，皮層Bcl-xL表達均明顯升高（均P<0.01），以電針作用為優(yōu)（P<0.

8、01）。
　　 模型組術(shù)后1天，皮層細胞Fas、P53表達明顯升高（P<0.01）。術(shù)后7天也明顯增高（P<0.01）。經(jīng)電針和喜得鎮(zhèn)治療1天和7天后，皮層細胞Fas、P53表達均顯著下降（均P<0.01），以電針作用為優(yōu)（P<0.01）。
　　 結(jié)論：
　　 電針腎俞、膈俞、百會穴對腦缺血再灌注損傷小鼠模型具有上調(diào)皮層神經(jīng)元Bcl-xL表達，下調(diào)Fas、P53表達，抑制皮層神經(jīng)元凋亡、促進其損傷修復(fù)等作用，改善