不同物種細胞色素C的抗氧化能力分析.pdf

1、本研究的核心內(nèi)容是不同物種來源的細胞色素C對線粒體活性氧產(chǎn)生的調(diào)節(jié)作用的比較分析，并試圖將細胞色素C對活性氧的清除能力與其分子結(jié)構(gòu)微變化進行一定的聯(lián)系，為以后闡述細胞色素C對人類疾病和壽命的影響打下基礎(chǔ)。
　　細胞色素c是一個以血紅素c為輔基的小而穩(wěn)定的血紅素蛋白，在細胞的能量代謝、細胞凋亡及自由基調(diào)節(jié)等諸多方面均起到重要的作用。本實驗組早期結(jié)果發(fā)現(xiàn)，線粒體中存在著細胞色素C介導(dǎo)的電子漏旁路途徑，可以原位的自主消除呼吸鏈附近的活性

2、氧，使活性氧水平處于一個動態(tài)平衡的狀態(tài)。初步結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，不同物種來源的細胞色素C在相同濃度下其抗自由基的能力不同，在本研究中對其進行了進一步的分析。
　　我們以去除細胞色素C的心肌制劑為實驗系統(tǒng)，以魯米諾聯(lián)合辣根過氧化物酶啟動的化學(xué)發(fā)光法測定系統(tǒng)內(nèi)過氧化氫的含量，以光澤精啟動的化學(xué)發(fā)光法測定系統(tǒng)內(nèi)超氧陰離子的含量。通過細胞色素C的拆合重組實驗測定不同濃度細胞色素C的抗氧化能力，確立了計算不同物種細胞色素C抗氧化能力的兩個反應(yīng)濃度：

3、高濃度（2μM）和低濃度（0.5μM）。選擇了來源于酵母、鴿子和牛三個不同物種的細胞色素C，將之放在同樣的反應(yīng)體系中，比較它們的抗氧化能力的差別。同時，我們也比較了細胞色素C在氧化狀態(tài)和還原狀態(tài)時其抗氧化能力的不同趨勢。
　　結(jié)果顯示：
　　1）在未達到飽和重組濃度的情況下，三個物種的常態(tài)細胞色素C對O2˙－和H2O2的清除作用隨物種不同而不同。清除能力最小的酵母源的細胞色素C只能清除43％的H2O2和63％的O2˙－，而清

4、除能力最強的鴿胸細胞色素C對兩種ROS的清除能力都在80％～90％。其抗氧化能力排序為鴿胸源>牛心源>酵母源。而高濃度的細胞色素C由于清除能力過強，未體現(xiàn)顯著性差異；
　　2）加入抗霉素A阻斷電子傳遞后，由于參比值的增加，高濃度重組常態(tài)細胞色素C均顯示了物種差異，其抗氧化能力排序為鴿胸源>牛心源>酵母源，與未加入抗霉素A的低濃度重組相同。在低濃度情況下，由于參比的提高，三種細胞色素C對O2˙－和H2O2的消除能力均降到了最大值的4

5、0％以下，且無明顯差異。
　　3）全還原態(tài)細胞色素C的抗氧化能力也隨物種不同而有區(qū)別。在高濃度細胞色素C重組的情況下，由于清除能力過強，差異不顯著。但在低濃度細胞色素C重組的情況下，鴿胸源的還原態(tài)細胞色素C抗氧化能力與酵母源的還原態(tài)細胞色素C的抗氧化能力相當(dāng)，強于牛心源的還原態(tài)細胞色素C。也就是說，其抗氧化能力的排序與常態(tài)細胞色素C相比有所不同。
　　4）在加入了抗霉素A阻斷電子傳遞鏈功能后，無論在高濃度重組情況下還是低濃度

6、重組情況下，酵母源和鴿胸源的還原態(tài)細胞色素C對ROS的清除能力較強且無顯著性差異，而牛心源的還原態(tài)細胞色素C清除ROS的能力相對較弱。
　　因此，大致結(jié)論如下：
　　A:細胞色素C的抗氧化能力，無論是通過氧化態(tài)消除O2˙－的能力還是還原態(tài)消除H2O2的能力，在不同物種來源中均有區(qū)別，其根源在于蛋白質(zhì)微結(jié)構(gòu)變化的影響。擴大物種的研究范圍，對它們的結(jié)構(gòu)進行精細分析，對于探討延緩衰老、預(yù)防老年退行性疾病具有一定的價值。