化濁解毒調(diào)肝方對(duì)免疫性肝纖維化大鼠MMP-1、TIMP-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：以“濁毒”理論為依據(jù)觀察化濁解毒調(diào)肝方對(duì)免疫性肝纖維化大鼠病理形態(tài)學(xué)及基質(zhì)金屬蛋白酶-1(MMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1(TIMP-1)表達(dá)的影響，探討其抗肝纖維化的療效及作用機(jī)理。
　　 方法：選用清潔級(jí)Wistar大鼠60只，雄性，體重200±20g。適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、化濁解毒調(diào)肝方大劑量組（簡(jiǎn)稱大劑組）、化濁解毒調(diào)肝方中劑量組（簡(jiǎn)稱中劑組）、化濁解毒調(diào)肝方小劑量組（簡(jiǎn)稱小劑組）、

2、秋水仙堿治療組(簡(jiǎn)稱西藥組)6組，每組10只。除正常對(duì)照組外，其余各組均采用未滅活的豬血清腹腔注射，每次0.5ml/只，每周2次，連續(xù)8周。秋水仙堿治療組和中藥治療組于造模的第8周末給藥，每天上午灌胃一次，每次2ml，連續(xù)4周。正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給予等量生理鹽水。各組分別于治療的第4周末處死，留取大鼠肝組織，采用蘇木精-伊紅染色觀察肝組織病理形態(tài)學(xué)的變化。采用免疫組化技術(shù)測(cè)定肝組織MMP-1、TIMP-1表達(dá)情況。所得數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)整理，

3、采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行檢驗(yàn)和方差分析。
　　 結(jié)果：
　　 1化濁解毒調(diào)肝方對(duì)免疫性肝纖維化大鼠體重、肝重、脾重的影響
　　 與正常對(duì)照組大鼠比較，模型組、西藥治療組大鼠體重明顯降低(P＜0.05)，肝重、脾重明顯增加（均P＜0.05）；各劑量中藥治療組大鼠體重、肝重、脾重較正常對(duì)照組均無(wú)明顯改變(均P＞0.05)。與模型組大鼠比較，各劑量中藥治療組大鼠體重明顯增加(P＜0.05)，肝重和脾重明顯減輕(

4、P＜0.05)。中藥大劑量組大鼠體重高于西藥治療組(P＜0.05)。各劑量中藥治療組之間比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　 2化濁解毒調(diào)肝方對(duì)免疫性肝纖維化大鼠病理形態(tài)學(xué)的影響
　　 正常組肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞圍繞中央靜脈呈放射狀排列，無(wú)變性壞死，無(wú)纖維組織增生。模型組肝組織病變區(qū)域多，面積大，正常肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，匯管區(qū)擴(kuò)大有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肝細(xì)胞腫脹，排列擁擠，見(jiàn)大小不等的空泡，脂肪變性廣泛，有部分壞死，匯管

5、區(qū)及中央靜脈周圍纖維組織增生。西藥組可見(jiàn)肝小葉結(jié)構(gòu)基本正常，以中央靜脈周圍肝細(xì)胞腫脹變性明顯，周邊區(qū)域較輕，炎細(xì)胞浸潤(rùn)、纖維組織增生較模型組明顯減輕。大劑組可見(jiàn)肝小葉結(jié)構(gòu)基本正常，肝組織病變區(qū)域較少，損傷程度輕，肝細(xì)胞排列正常，僅見(jiàn)中央靜脈周圍肝細(xì)胞空泡樣變性。中劑組病變區(qū)域面積較小劑組小。小劑組肝細(xì)胞炎癥不顯著，可見(jiàn)少量脂肪變性空泡，肝小葉結(jié)構(gòu)基本正常，肝細(xì)胞排列尚整齊，中央靜脈周圍可見(jiàn)部分肝細(xì)胞變性，病變區(qū)域面積較模型組、西藥組小，

6、且肝細(xì)胞變性程度輕。
　　 3化濁解毒調(diào)肝方對(duì)免疫性肝纖維化大鼠肝組織MMP-1表達(dá)的影響
　　 MMP-1主要表達(dá)在纖維間隔和匯管區(qū)的間質(zhì)細(xì)胞，顏色呈棕黃色。其表達(dá)強(qiáng)度依次為大劑組、中劑組、小劑組、西藥組、模型組，在正常組表達(dá)最弱。各藥物治療組與模型組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說(shuō)明治療組對(duì)MMP-1陽(yáng)性表達(dá)有顯著的激活作用；西藥組與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；大劑組與西藥組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

7、義(P＜0.05)；大劑組與中、小劑組比較差異不明顯(P＞0.05)：因此中藥治療組對(duì)MMP-1陽(yáng)性表達(dá)的激活作用優(yōu)于西藥對(duì)照組。
　　 4化濁解毒調(diào)肝方對(duì)免疫性肝纖維化大鼠肝組織TIMP-1表達(dá)的影響
　　 TIMP-1表達(dá)強(qiáng)度依次為模型組、西藥組、大劑組、中劑組、小劑組，在正常組表達(dá)最弱。正常組大鼠肝組織見(jiàn)少許TIMP-1陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞，模型組大鼠肝組織中表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞比例顯著高于正常組，表現(xiàn)為不均勻的黃褐色顆粒狀物。

8、與模型組相比，各藥物治療組大鼠肝組織TIMP-1蛋白表達(dá)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）；西藥組與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；大劑組與西藥組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）；大劑組與中、小劑組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。因此中藥治療組作用優(yōu)于西藥對(duì)照組。
　　 結(jié)論：
　　 1化濁解毒調(diào)肝方可以改善免疫性肝纖維化大鼠模型的一般狀況。
　　 2 HE染色結(jié)果顯示：化濁解毒調(diào)肝方能

9、使HF模型大鼠肝小葉大部分恢復(fù)，中央靜脈和匯管區(qū)纖維組織減少，該方能增強(qiáng)機(jī)體的纖維溶解能力，對(duì)肝纖維化大鼠有較強(qiáng)的恢復(fù)作用。
　　 3化濁解毒調(diào)肝方能促進(jìn)HF模型大鼠MMP-1的表達(dá)，同時(shí)抑制TIMP-1的表達(dá)，通過(guò)調(diào)節(jié)MMPs和TIMPs的失衡，促進(jìn)異常合成的細(xì)胞外基質(zhì)的降解，減少細(xì)胞外基質(zhì)的過(guò)度沉積，而逆轉(zhuǎn)肝纖維化。
　　 4實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，化濁解毒調(diào)肝方對(duì)HF的治療具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值，從而為本病的治療開(kāi)辟一條新的