妊娠早期單核細胞異質性分析及滋養(yǎng)層細胞系HTR8-SVneo對其影響的研究.pdf

1、母體對植入胚胎免疫耐受的同時抵抗病原體（病毒，細菌）感染是成功妊娠的關鍵。機體維持母胎間的免疫耐受并有效抵御病原體感染包含大量復雜、彼此相關聯(lián)的事件，受到嚴格的時空調控。母胎間免疫耐受的不足往往導致病理性妊娠如先兆子癇、習慣性流產等疾病的發(fā)生；然而過度耐受又會導致無法有效抵御病原體感染，因此維持理想的耐受-抗感染平衡對于妊娠的順利進行至關重要。已知母胎界面存在的眾多免疫細胞參與母胎免疫耐受及抗感染，單核細胞作為該部位第二大免疫細胞群體在

2、此過程中發(fā)揮重要作用。單核細胞是一類具有高度異質性的細胞群體，主要分為CD14+CD16－單核亞群以及CD14+CD16+單核亞群。已有的報道指出，CD14+CD16+單核亞群具有高度的免疫抑制功能有利于維持局部免疫耐受；與之相反，CD14+CD16－單核亞群則能有效啟動機體的免疫應答從而抵御潛在的外部感染。因此，對妊娠過程中母體外周血以及蛻膜組織局部單核異質性的研究有助于更好的理解病理性妊娠并對相關疾病的防治提供新的思路。滋養(yǎng)層作為胚

3、胎最初與母體接觸的組織，在胚胎與母體子宮內膜間有效的交流過程中必不可少，因此滋養(yǎng)層與母體免疫系統(tǒng)間的相互作用備受關注。然而，有關滋養(yǎng)層細胞對蛻膜局部單核細胞作用的相關研究尚未見報道。基于此，本研究利用滋養(yǎng)層細胞系HTR8-SVeno細胞作為滋養(yǎng)層細胞模型，觀察分析體外模擬妊娠早期條件下HTR8-SVeno細胞對于人外周血來源單核細胞各亞群分布的調節(jié)，以及模擬妊娠早期病原體感染(LPS)條件下HTR8-SVeno細胞對于單核細胞各亞群再分

4、布的調節(jié)。
　　 1．目的
　　 觀察正常早孕人外周血以及蛻膜組織局部單核細胞各亞群分布比例。體外模擬母胎界面微環(huán)境，檢測滋養(yǎng)層細胞系HTR8-SVneo細胞對單核細胞各亞群分布的調控及病原體感染(LPS)條件下HTR8-SVeno細胞對于單核細胞各亞群再分布的調節(jié)。揭示胚胎組織參與調控母胎間免疫耐受，為滋養(yǎng)層與母胎間免疫微環(huán)境的關系提供理論依據，從而有利于病理性妊娠發(fā)病與治療的認識。
　　 2．方法
　　

5、 2.1流式細胞術檢測年齡為20～35歲的早孕婦女(19例)與健康未孕者(13例)外周單核細胞CD14+CD16－亞群以及CD14+CD1礦亞群分布比例；
　　 2.2流式細胞術檢測健康婦女妊娠早期蛻膜組織(6例)單核細胞單核細胞CD14+CD16－亞群以及CD14+CD16+亞群分布比例；
　　 2.3流式細胞術檢測體外培養(yǎng)時間(4h、8h、12h)對人外周血單核細胞CD14+CD16－亞群以及CD14+CD16+亞

6、群分布的影響；
　　 2.4流式細胞術檢測HTR8-SVneo滋養(yǎng)細胞與單核細胞等比例共培養(yǎng)4h、8h、12h對單核細胞CD14+CD16－亞群以及CD14+CD16+亞群分布的影響；
　　 2.5流式細胞術檢測LPS(100ng/mL)對單核細胞（單獨培養(yǎng)組）各亞群分布的影響、對HTR8-SVneo細胞誘導的單核細胞（單核細胞與HTR8共培養(yǎng)組）各亞群分布的影響。
　　 3.1健康未孕者外周血單核細胞以CD14

7、+CD16－亞群為主要群體，其陽性頻率為（88.34±3.73）％，CD14+CD16+亞群僅為（11.5Q士3.7）％；與健康未孕女性外周血比較，早孕婦女外周血單核細胞CD14+CD16－亞群顯著上升，（陽性頻率為(91.79±7.59)％，P＜0.01)，CD14+CD16+亞群單核細胞亞群比例顯著降低（陽性頻率為（8.21士4.73）％，P＜0.05)。
　　 3.2妊娠早期，CD14+CD16+細胞亞群是蛻膜組織中CD1

8、4+細胞的主要亞群，其陽性頻率為（69.13±7.73）％，而早孕婦女外周血中CD14+CD16+細胞亞群僅為（8.21±4.73）％，二者比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）：CD14+CD16－亞群約占蛻膜組織中CD14+細胞的（32.5±5.65）％，顯著低于早孕婦女外周血的陽性頻率(91.79±7.59)％，P＜0.05。
　　 3.3利用磁分選技術獲取的人外周血單核細胞在體外分別培養(yǎng)4h、8h、12h后，CD14+CD

9、16+亞群分別占總單核細胞的（8.31士0.22）％、（8.28士0.34）％、(8.26±:0.12)％，三者比較差異無統(tǒng)計學意義。由此可見，在12小時離體培養(yǎng)過程中單核細胞各亞群比例無顯著變化。
　　 3.4單獨培養(yǎng)單核細胞經LPS(100ng/mL)刺激12h后，CD14+CD16+單核細胞亞群比例與無LPS刺激組比較無顯著變化(7.89％ vs7.63％);而HTR8-SVneo滋養(yǎng)細胞與單核細胞共培養(yǎng)組經LPS(100

10、ng/mL)刺激后，HTR8-SVneo滋養(yǎng)細胞誘導的CD14+CD16+單核細胞亞群比例上調受到顯著抑制(16.64％ vs4.54％，P＜0.05)。
　　 4．結論
　　 4.1妊娠早期外周CD14+CD16+亞群單核細胞比例顯著降低；與之相反，蛻膜組織中該亞群比例卻顯著上升，并成為單核細胞的優(yōu)勢群體；
　　 4.2滋養(yǎng)層細胞系HTR8-SVneo能夠誘導CD14+CD16+亞群單核細胞比例顯著上升，提示體

11、內蛻膜組織局部該亞群單核細胞的優(yōu)勢地位可能與滋養(yǎng)層調控相關：LPS刺激條件下，HTR8-SVneo誘導的CD14+CD16+亞群單核細胞比例上調受到顯著抑制。
　　 綜上所述，在早期妊娠過程中，母胎界面存在的CD14+CD16+亞群單核細胞的優(yōu)勢地位有利于母體對胚胎免疫耐受的建立及維持。進一步的研究發(fā)現，滋養(yǎng)層細胞對該亞群單核細胞優(yōu)勢分布發(fā)揮正向調節(jié)作用，從而有利于胚胎的順利植入；然而當有病原微生物刺激時(LPS)，滋養(yǎng)層又能下