肝癌組織中異常表達(dá)基因microRNA結(jié)合位點(diǎn)遺傳變異及肝癌患者血清microRNA的研究.pdf

1、目的:肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展過程中基因表達(dá)變化已有大量報(bào)道,然而基因表達(dá)變化的機(jī)制并未完全闡明。引起基因表達(dá)失調(diào)的因素眾多,包括單核苷酸多態(tài)(singlenucleotide polymorphism,SNP),拷貝數(shù)變異(copy number variation,CNV),甲基化,microRNA(miRNA)等。MiRNA在基因表達(dá)調(diào)控中發(fā)揮重要作用,通過與靶基因的互補(bǔ)序列結(jié)合調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯,而位于miRNA靶基因3′非翻譯區(qū)的單

2、核苷酸多態(tài)可能改變靶基因與miRNA的結(jié)合而影響基因表達(dá),從而影響了個(gè)體的腫瘤易感性。血清miRNA作為腫瘤標(biāo)志物具有高穩(wěn)定性和高敏感性的特點(diǎn),已在多種腫瘤研究中得到驗(yàn)證。本研究篩查肝細(xì)胞癌中表達(dá)失調(diào)基因的3′非翻譯區(qū)遺傳變異和探討其與肝細(xì)胞癌發(fā)生的關(guān)系,并檢測候選的血清miRNA尋找作為肝細(xì)胞癌診斷的標(biāo)志物。
　　 方法:通過數(shù)據(jù)庫挖掘,尋找位于肝細(xì)胞癌表達(dá)失調(diào)基因3′非翻譯區(qū)有潛在功能的遺傳變異。病例-對(duì)照研究包括1,876

3、例肝細(xì)胞癌病人和2,044例正常對(duì)照。采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長度多態(tài)性和taqMan探針方法分析基因型。以bgistic回歸模型計(jì)算各基因型的比值比(odds ratios,ORs)及其95％可信區(qū)間(confidenceintervals,CIs)以表示相對(duì)危險(xiǎn)度。通過肝癌miRNA表達(dá)譜數(shù)據(jù)挖掘,尋找肝癌組織中表達(dá)失調(diào)的miRNA作為候選的血清miRNA標(biāo)志物。采用real-time定量PCR檢測89例正常對(duì)照、101例肝細(xì)

4、胞癌病人和48例慢性肝炎病人三組血清樣本中候選-miRNA的含量。以Mann-Whitney U檢驗(yàn)計(jì)算三組樣本之間候選miRNA的含量差異。
　　 結(jié)果:數(shù)據(jù)庫挖掘發(fā)現(xiàn)在肝細(xì)胞癌表達(dá)失調(diào)基因中有四個(gè)可能影響miRNA功能的遺傳變異,即rs4577(ALDOB3′UTR C>T),rs10900031(CXCL12 YUTR G>A),rs17033(ADH1B3′UTR T>C),rs655445(THRSP3′UTR G>A

5、)。病例-對(duì)照分析表明,rs4577 TT基因型攜帶者比CC基因型攜帶者發(fā)生肝細(xì)胞癌易感性提高15％(OR=1.15,95％CI=1.04—1.27,p=0.020)。性別分層分析發(fā)現(xiàn),rs4577 C>T在男性人群中與肝細(xì)胞癌易感性無顯著相關(guān)性,在女性人群中與肝細(xì)胞癌易感性有顯著相關(guān)性,rs4577 TT基因型攜帶者比CC基因型攜帶者發(fā)生肝細(xì)胞癌的風(fēng)險(xiǎn)提高43％(OR=1.43,95％CI=1.13-1.81,p=0.008)。年齡分

6、層分析表明,在<60歲研究對(duì)象中rs4577 C>T與肝細(xì)胞癌易感性相關(guān),而在>60歲人群中不相關(guān)。另外三個(gè)SNP即rs10900031,rs17033和rs655445與肝細(xì)胞癌易感性無顯著性。生物信息學(xué)分析提示ALDOB是hsa-miR-877靶基因,hsa-miR-877可能抑制ALDOB rs4577T等位基因轉(zhuǎn)錄。血清microRNA分析顯示,miR-21,miR-122和miR-223在肝癌患者(P=2.05×10-12,P

7、=4.52×10-16,P=1.65×10-11)和慢性乙肝患者(P=2.05×10-12P=4.52×10-16,P=1.65×10-11)血清中含量均顯著高于正常對(duì)照。慢性乙肝病人血清中miR-21和miR-122含量顯著高于肝癌病人(P=3.99×10-4,P=4.97×10-8),而慢性乙肝和肝癌病人血清中miR-223含量差異無顯著性(P=0.955)。
　　 結(jié)論:ALDOB基因遺傳變異rs4577 C>T增加肝細(xì)胞