MUC1對胰腺導(dǎo)管腺癌的診斷效能及muc1-tfR-pDC316載體的構(gòu)建.pdf

1、第一部分 MUC1對胰腺導(dǎo)管腺癌的診斷效能—-19個病例對照研究的Meta分析 背景：胰腺癌是人類最惡性的腫瘤之一。發(fā)病率逐漸升高、病因不明確、早期診斷難、現(xiàn)有的治療手段對局部晚期或轉(zhuǎn)移性胰腺癌收效甚微造成目前胰腺癌治療的困境，因此有必要提高胰腺癌的早診率以改善患者的生存預(yù)后。但影像學(xué)診斷、腫瘤標(biāo)志物以及基因突變檢測等手段對診斷早期胰腺癌均存在程度不一的局限性，有必要探索更敏感而特異的胰腺癌標(biāo)記物。 粘蛋白-1(MUC

2、1)是一種高糖基化、高分子量的跨膜糖蛋白，可潤滑和保護上皮組織，參與上皮細胞的更新、細胞黏著的調(diào)節(jié)和細胞信號的傳導(dǎo)，并可釋放某些活性分子、參與細胞免疫。正常腺上皮細胞有較低水平的MUC1表達。研究發(fā)現(xiàn)，在胰腺癌發(fā)生的早期可觀察到MUC1的過度表達，隨著腫瘤的進展而逐漸增加，并且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、生存期顯著相關(guān)。因?qū)Ч芟侔┱家认賽盒阅[瘤的90％以上，本研究通過Meta分析探討MUC1對胰腺導(dǎo)管腺癌的診斷效能，為MUC1可作為胰腺癌標(biāo)記物提供依

3、據(jù)。 研究目的：通過Meta分析探討MUC1在胰腺導(dǎo)管腺癌中的診斷價值，試圖為MUC1可作為胰腺癌標(biāo)記物提供依據(jù)。 檢索策略：系統(tǒng)檢索MEDLINE數(shù)據(jù)庫(1966-2008)、EMBASE數(shù)據(jù)庫(1966-2008)、中國生物醫(yī)學(xué)文獻數(shù)據(jù)庫(CBMdisc，1981-2008)、中國期刊網(wǎng)全文數(shù)據(jù)庫(1979-2008)、ASCO論文集(1995-2008)、Cochrane圖書館等數(shù)據(jù)庫，收集國內(nèi)外已發(fā)表和未發(fā)表的相

4、關(guān)文獻，無語言限制。截止時間為2008-12-31。 納入標(biāo)準(zhǔn): (1)研究類型為前瞻性觀察對照研究、或有對照的橫斷面研究、或回顧性病例對照研究；(2)金標(biāo)準(zhǔn)：病理診斷；(3)研究對象：經(jīng)金標(biāo)準(zhǔn)診斷的胰腺導(dǎo)管腺癌(不包括導(dǎo)管腺癌以外的惡性胰腺腫瘤或轉(zhuǎn)移性胰腺癌)和胰腺的非腫瘤性病變；(4)干預(yù)措施：應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測MUC1：(5)必須能從文獻全文或摘要中獲得完整的四格表數(shù)據(jù)以計算敏感性、特異性。 資料收集與分

5、析: 由2位評價者分別按上述策略收集資料，嚴(yán)格按納入和排除標(biāo)準(zhǔn)進行篩選，對符合納入標(biāo)準(zhǔn)的文獻均需要查閱其全文以便進一步作出判斷及進行數(shù)據(jù)提取、歸納，并對納入研究的方法學(xué)質(zhì)量按內(nèi)部和外部標(biāo)準(zhǔn)進行評價。本研究的分析指標(biāo)為敏感度(Sen)、特異度(Spe)、陽性似然比(LR+)、陰性似然比(LR-)、診斷優(yōu)勢比(DOR)、綜合受試者工作特征(SROC)曲線下面積(AUC)和Q*指數(shù)。本研究的統(tǒng)計分析采用Meta分析軟件DiSc1.4完

6、成(從Cochrane圖書館下載)。研究間的異質(zhì)性分析由Meta分析軟件完成。 主要結(jié)果： 本研究共納入19個回顧性病例對照研究，共納入1228例患者。匯總處理結(jié)果顯示MUC1免疫組化檢測診斷胰腺癌的總敏感度為0.87(95％CI：0.84～0.89)、總特異度為0.68(95％CI：0.64～0.72)、總陽性似然比為4.12(95％CI：2.5～6.79)、總陰性似然比為0.19(95％CI：0.12～0.28)、總

7、DOR為35.41(95％CI：14.88～84.29)。SROC曲線下面積(AUC)為0.9248，SE—0.0232。Q*指數(shù)為0.8589。異質(zhì)性檢驗提示無閾值效應(yīng)，但研究間存在異質(zhì)性。 結(jié)論：免疫組化檢測MUC1對胰腺導(dǎo)管腺癌有較高的診斷價值，可作為胰腺癌的診斷指標(biāo)之一。 第二部分 mucl—tfR—pDC316載體的構(gòu)建 背景：我們的前期研究檢索了免疫組化檢測MUC1診斷胰腺導(dǎo)管腺癌的文獻資料，共納入

8、19個病例對照研究，涉及1228例患者，結(jié)果表明免疫組化檢測MUC1對胰腺導(dǎo)管腺癌有一定的診斷價值，可作為胰腺癌的診斷指標(biāo)之一。但免疫組化檢測須獲得臟器組織，帶有創(chuàng)傷性，有必要進一步研究非創(chuàng)傷性檢查手段，如設(shè)計靶向載體介導(dǎo)MUC1特異性表達于胰腺臟器等。 研究表明：MUC1啟動子在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控基因表達，具有較高的組織和細胞特異性，MUC1啟動子能調(diào)控目的基因在MUC1陽性的腫瘤細胞內(nèi)靶向表達。ETR(Engineered Tra

9、nsferrin Receptor，ETR)基因是工程化的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TfR)的基因片段，ETR保留了編碼轉(zhuǎn)鐵蛋白受體必需的編碼區(qū)和啟動子序列，而去除了3’端非編碼區(qū)中參與細胞內(nèi)鐵負(fù)反饋調(diào)節(jié)的序列，ETR既可編碼表達TfR，又避免了細胞內(nèi)高鐵濃度對TfR表達的抑制作用，從而不斷通過TfR—Tf介導(dǎo)的胞飲作用，吞噬鐵離子，達到細胞內(nèi)有效顯像濃度離子鐵聚集的目的。 本研究將采用腺病毒作為基因載體，構(gòu)建一種包含MUC1啟動子轉(zhuǎn)錄調(diào)控

10、序列和ETR基因的重組表達載體。 研究目的：構(gòu)建包含MUC1啟動子轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列和ETR基因的重組表達載體，為胰腺癌分子顯像研究提供實驗物質(zhì)基礎(chǔ)。 方法：以人血液基因組DNA為模板，利用PCR技術(shù)擴增MUC1啟動子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列。以SW480 cDNA為模板，利用PCR技術(shù)擴增tfR基因可編碼區(qū)的基因片段。采用基因重組方法構(gòu)建質(zhì)粒muc1-tfR—pDC316。 結(jié)果：擴增的MUC1啟動子核心調(diào)控序列與參考序列相符