T淋巴細胞胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導途徑mTOR-S6在難治-復發(fā)再生障礙性貧血免疫發(fā)病機制中的作用.pdf

1、研究目的： 1.難治/復發(fā)再生障礙性貧血(AA)患者骨髓T淋巴細胞內(nèi)mTOR/S6途徑是否被活化。 2.研究雷帕霉素(RAPA)和CTLA-4免疫球蛋白(CTLA-4Ig)對難治/復發(fā)AA患者T淋巴細胞內(nèi)mTOR/S6途徑的作用，尋找AA免疫抑制治療(IST)的新靶點。 3.骨髓增生異常綜合征(MDS)-難治性貧血(RA)/環(huán)形鐵粒幼細胞性難治性貧血(RAS)患者骨髓T淋巴細胞內(nèi)mTOR/S6途徑的變化。

2、 研究方法： 1.用流式細胞術(shù)(FCM)檢測13例難治/復發(fā)性AA、8例初治重型AA(SAA)患者骨髓CD3+、CD3+CD8-、CD3+CD8+T淋巴細胞胞漿內(nèi)磷酸化mTOR(p-mTOR)、磷酸化(p-S6)和γ-干擾素(IFN-γ)的表達量。同時以10例缺鐵性貧血(IDA)和1 8例MDS-RA/RAS患者分別為正常對照組和病例對照組，研究mTOR/S6途徑在難治/復發(fā)AA患者體內(nèi)是否被活化。 2.取患者骨髓進行體

3、外培養(yǎng)，分別加入RAPA和CTLA-4Ig孵育24小時和72小時，再用FCM檢測CD3+、CD3+CD8-、CD3+CD8+T淋巴細胞胞內(nèi)p-mTOR、p-S6和IFN-γ的表達變化，評價RAPA和CTLA-4Ig這兩種藥物對AA患者mTOR/S6途徑的影響。 研究結(jié)果： 1.難治/復發(fā)AA患者p-mTOR、p-S6及IFN-γ在骨髓CD3+、CD3+CD8-、CD3+CD8+T細胞胞內(nèi)的表達量較正常對照組顯著升高(P均

4、<0.01)。 2.初治SAA患者p-mTOR和p-S6在骨髓CD3+、CD3+CD8-、CD3+CD8+T細胞胞內(nèi)的表達量低于難治/復發(fā)AA組(P均<0.01)，而與正常對照比較無差異(P均>0.05)； IFN-γ在骨髓CD3+、CD3+CD8-、CD3+CD8+T細胞胞內(nèi)的表達量明顯高于正常對照組(P均<0.01)，而CD3+IFN-γ+和CD3+CD8-IFN-γ+的表達量均低于難治/復發(fā)AA組(P均<0.05)

5、，CD3+CD8+IFN-γ+則與難治/復發(fā)AA組無差異(P>0.05)。 3.RAPA作用后，難治/復發(fā)從患者P-mTOR、p-S6及IFN-γ在骨髓CD3+、CD3+CD8-、CD3+CD8+T細胞胞內(nèi)的表達量較用藥前明顯下降(P均<0.05)。而CTLA-4Ig作用后，p-mTOR、p-S6及IFN-γ在骨髓CD3+、CD3+CD8-、CD3+CD8+T細胞胞內(nèi)的表達量亦較用藥前明顯減少(P均<0.01)。 4.MDS組T

6、細胞內(nèi)的p-mTOR和IFN-γ的表達量及CD3+CD8+p-S6+均高于正常對照組(P均<0.05)，CD3+p-S6+和CD3+CD8-p-S6+表達量與正常對照組無顯著差異(P均>0.05)。 5.以正常對照組CD3+T細胞胞內(nèi)p-mTOR表達量的95％可信區(qū)間上限值(2.62％)為分界線，將MDS患者分為兩組，CD3+p-mTOR+表達量高于2.62％的病例歸為MDS Ⅰ組，低于2.62％的病例為MDSⅡ組。 M

7、DS Ⅰ組p-mTOR、p-S6及IFN-γ在骨髓CD3+、CD3+CD8-、CD3+CD8+T細胞胞內(nèi)的表達量均高于正常對照組(P均<0.05)。 MDS Ⅱ組p-mTOR在骨髓CD3+、CD3+CD8-、CD3+CD8+T細胞胞內(nèi)的表達量低于正常對照(P均<0.05)；CD3+、CD3+CD8-T細胞內(nèi)的p-S6含量較正常對照降低(P均<0.05)，而CD3+CD8+p-S6+含量與正常對照無差異(P>0.05)；IFN-γ

8、在骨髓CD3+、CD3+CD8-、CD3+CD8+T細胞胞內(nèi)的表達量與正常對照組無統(tǒng)計學差異(P均>0.05)。 6.RAPA作用后，MDS Ⅰ組p-mTOR在骨髓CD3+、CD3+CD8-、CD3+CD8+T細胞胞內(nèi)的表達量較加藥前下降(P均<0.05)，每組各有5/10的病例抑制率>50％。 CD3+p-S6+和CD3+CD8-p-S6+的表達量與RAPA處理前無明顯變化(P均>0.05)，每組分別有2/10和4/1

9、0的病例抑制率>50％；而CD3+CD8+p-S6+較用藥前下降(P<0.05)，有6/10的病例抑制率>50％。 IFN-γ在骨髓CD3+、CD3+CD8-、CD3+CD8+T細胞胞內(nèi)的表達量與加藥前比無統(tǒng)計學差異(P均>0.05)，每組分別有4/10、4/10和3/10的病例抑制率>50％。 研究結(jié)論： 1.T淋巴細胞內(nèi)mTOR/S6途徑在正常人和初治SAA患者中靜息，在難治/復發(fā)從患者中活化。 2．

10、RAPA和CTL-A-4Ig均可抑制難治/復發(fā)AA患者體內(nèi)mTOR/S6途徑，并下調(diào)IFN-γ。 3．CD28/mTOR/S6/IFN-γ途徑參與難治/復發(fā)AA的免疫發(fā)病機制，并且對RAPA和CTLA-4Ig敏感，以CD28/mTOR為治療靶點，臨床應(yīng)用RAPA和CTLA-4Ig治療此類AA患者值得探索。 4．部分MDS-RA/RAS患者的T細胞存在mTOR/S6途徑活化，但呈異質(zhì)性表現(xiàn)，RAPA能抑制部分MDS此途徑活