留蘭香油對脂多糖或豬胰彈性蛋白酶引起的肺氣腫樣改變及MMP-9的影響.pdf

1、目的:觀察留蘭香油對脂多糖引起的大鼠肺氣腫樣改變及豬胰彈性蛋白酶引起的C57小鼠肺氣腫樣改變及對MMP-9的影響。
　　 方法:
　　 (1)SD大鼠隨機分為6組:①空白對照組;②模型組;③留蘭香油10 mg·kg-1組;④留蘭香油30 mg·kg-1組;⑤留蘭香油100 mg·kg-1組;⑥地塞米松0.3 mg·kg-1組。反復(fù)氣道內(nèi)滴入脂多糖200μg(溶于200μL生理鹽水)8周建立大鼠肺氣腫樣改變模型,留蘭香油及

2、地塞米松灌胃治療4周。測定大鼠肺功能氣道阻力(RL)及肺順應(yīng)性(Cdyn);計數(shù)大鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)中白細胞總數(shù)及其分類;肺組織病理切片行HE、AB-PAS染色,觀察肺泡結(jié)構(gòu)、氣道炎癥及杯狀細胞化生,并對病理圖像進行形態(tài)學(xué)測量分析;ELISA檢測肺組織、TNF-α、IL-1β和TIMP-1的含量及MMP-9的表達水平。所有數(shù)據(jù)使用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行分析。(2)C57小鼠隨機分為6組:①空白對照組;②模型組;③留蘭香

3、油14 mg·kg-1組;④留蘭香油42 mg·kg-1組;⑤留蘭香油141 mg·kg-1組;⑥地塞米松0.42 mg·kg-1組。每只C57小鼠氣管內(nèi)一次性滴入4.5 U(溶于50μL生理鹽水)豬胰彈性蛋白酶,空白對照組氣管內(nèi)滴入等量生理鹽水。第4周開始給藥,給藥3周后放血處死。肺組織病理切片行HE染色,觀察肺泡結(jié)構(gòu)、氣道炎癥,并對病理圖像進行形態(tài)學(xué)測量分析;用半定量RT-PCR方法檢測C57小鼠肺組織中MMP-9、TIMP-1、I

4、L-8及TNF-α mRNA的表達量。所有數(shù)據(jù)使用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行分析。
　　 結(jié)果:
　　 (1)模型組大鼠的基礎(chǔ)RL值較對照組增加了107.6％,并且基礎(chǔ)Cdyn值下降了17.9％;留蘭香油10、30、100 mg·kg-1組的大鼠RL值分別較模型組下降41.6％、11.7％、19.0％,其中留蘭香油10mg·kg-1組的RL值較模型組有顯著改善(P＜0.05);留蘭香油10、30、100 mg·kg-1

5、組的大鼠Cdyn值較模型組增加了3.1％、16.9％、5.9％。(2)模型組大鼠BALF中白細胞總數(shù)、分類中中性粒細胞、淋巴細胞及單核巨噬細胞數(shù)均顯著高于對照組(P＜0.001),留蘭香油100mg·kg-1組及地塞米松治療組與模型組比較均顯著降低(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001)。
　　 (3)模型組大鼠肺泡大小不等,結(jié)構(gòu)紊亂,肺泡管、肺泡囊和肺泡明顯擴張,肺泡壁變薄,并有不同程度的撕裂,融合成肺大泡,與對照組比較

6、,肺平均內(nèi)襯間隔(Lm)明顯增大(P＜0.001),單位面積內(nèi)平均肺泡數(shù)(MAN)明顯減少(P＜0.001);留蘭香油組及地塞米松組與模型組比較均能使LM明顯減小,MAN顯著增多(P＜0.01,P＜0.001),肺泡破壞減少。
　　 (4)模型組大鼠可見不同程度的細支氣管炎及肺間質(zhì)炎,炎癥細胞明顯浸潤。留蘭香油組及地塞米松組細支氣管炎及肺間質(zhì)炎癥較模型組有所減輕,炎癥細胞浸潤減少,肺組織病理炎癥程度明顯減輕。
　　 (5

7、)模型組與正常組比較,支氣管、細支氣管杯狀細胞明顯化生,杯狀細胞陽性％明顯增高(P＜0.001)。留蘭香油100 mg·kg-1組和地塞米松治療組較模型組陽性杯狀細胞增生明顯減少,杯狀細胞陽性％明顯降低(P＜0.05)。
　　 (6)ELISA結(jié)果顯示:模型組肺組織勻漿中的TNF-α含量高于對照組(P＜0.05),留蘭香油30 mg·kg-1組及地塞米松組與模型組比較有顯著差異(P＜0.05,P＜0.001);模型組肺組織勻漿中

8、的IL-1β含量高于對照組(P＜0.001),留蘭香油100 mg·kg-1組及地塞米松組與模型組比較均有顯著差異(P＜0.05,P＜0.01);模型組肺組織勻漿中的TIMP-1與空白對照組比較無顯著性差異。
　　 (7)免疫組化圖像結(jié)果表明:炎癥細胞如巨噬細胞、中性粒細胞強陽性表達呈棕黃色,肺泡上皮細胞、支氣管上皮細胞等結(jié)構(gòu)細胞弱陽性表達呈黃色。Image Pro-Plus6.0圖像分析系統(tǒng)檢測大鼠肺組織中MMP-9表達的平均

9、光密度值(MOD),模型組肺組織MMP-9表達水平顯著高于對照組(P＜0.001),留蘭香油組和地塞米松組與模型組比較均顯著降低(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001)。(8)C57小鼠的肺泡結(jié)構(gòu):模型組可見肺泡管、肺泡囊和肺泡明顯擴張,肺泡壁變薄,并有不同程度的斷裂,融合成大泡。與模型組相比,留蘭香油組及地塞米松組小鼠肺泡壁斷裂和肺泡腔擴張情況有所減輕。模型組與對照組比較,Lm明顯增大,MAN明顯減少;留蘭香油42 mg·kg-

10、1組及地塞米松組與模型組比較均能使Lm明顯減小,MAN顯著增多,肺泡破壞減少。
　　 (9)MMP-9、TIMP-1、TNF-α、IL-8 mRNA的表達:模型組小鼠肺組織MMP-9、TIMP-1、TNF-α、IL-8與β-actin的比值較空白對照組顯著升高;留蘭香油14、42mg·kg-1及地塞米松組能顯著降低MMP-9 mRNA的表達;留蘭香油14、42、141mg·kg-1及地塞米松組TIMP-1 mRNA的表達雖較模型

11、組有所下降,但均無顯著性差異;留蘭香油42、141 mg·kg-1均能降低TNF-α及IL-8 mRNA的表達。
　　 結(jié)論:
　　 (1)LPS反復(fù)氣道內(nèi)滴入能引起大鼠伴有慢性炎癥反應(yīng)的肺氣腫樣改變,表現(xiàn)為肺泡腔擴大,肺泡壁變薄、斷裂,融合成肺大泡,肺組織炎癥細胞浸潤,杯狀細胞化生,而留蘭香油對LPS引起的肺泡破壞、炎癥反應(yīng)和肺功能等均有保護作用,其機制可能是降低了肺組織TNF-α、IL-1β的含量,抑制了MMP-9的