胰蛋白酶所致大鼠急性腎損傷中MMP-9、AQP-1的變化及影響.pdf

1、目的：經(jīng)大鼠尾靜脈持續(xù)注射胰蛋白酶的方法建立胰蛋白酶誘導(dǎo)的急性腎損傷的動(dòng)物模型，觀察水通道蛋白-1（Aquaporin-1，AQP-1）和基質(zhì)金屬蛋白酶-9（Matrix metalloproteinases-9，MMP-9）在腎臟組織中的表達(dá)變化情況，探討AQP-1和MMP-9在胰蛋白酶所致的急性腎損傷中的影響。
　　方法：隨機(jī)將48只雄性SD大鼠分為2組，每組24只，分組如下：對(duì)照組（生理鹽水注射組)，實(shí)驗(yàn)組（胰蛋白酶注射組）

2、。每組按實(shí)驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)再隨機(jī)分為3h組、6h組、12h組、24h組，每個(gè)時(shí)間組6只大鼠。實(shí)驗(yàn)組：通過(guò)微量泵持續(xù)大鼠尾靜脈注射胰蛋白酶（15000U/Kg/h）。對(duì)照組：同樣方法于大鼠尾靜脈置套管針連接微量泵注入等量的生理鹽水。分別于造模成功后3h、6h、12h、24h后處死，在光學(xué)顯微鏡下行腎組織的病理學(xué)觀察；檢測(cè)血清肌酐（creatinine, Cr）、血尿素氮（blood urea nitrogen, BUN）以及腫瘤壞死因子-α（tu

3、mor necrosis factor-α, TNF-α）、白介素-1β（interleukin-1β, IL-1β）水平的變化；應(yīng)用 Western blotting方法觀察AQP-1蛋白和MMP-9蛋白在腎臟組織中表達(dá)變化，并通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法檢測(cè)在腎組織中AQP-1mRNA和MMP-9mRNA表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：
　　1. HE染色結(jié)果顯示，對(duì)照組大鼠腎組織無(wú)明顯病理改變，實(shí)驗(yàn)組腎組織腎小球、腎間質(zhì)充血、

4、腫脹，并伴有炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，隨著時(shí)間的增加，腎臟損害加重，甚至出現(xiàn)腎小管的變性壞死。血清學(xué)檢測(cè)對(duì)照組間各時(shí)間點(diǎn)Cr、BUN、TNF-α、IL-1β水平均無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組血清Cr、BUN、TNF-α、IL-1β水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；實(shí)驗(yàn)組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)血清Cr、BUN、TNF-α、IL-1β水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　2.通過(guò)Weste

5、rn blotting方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組間各時(shí)間點(diǎn)AQP-1及MMP-9蛋白均無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。實(shí)驗(yàn)組組內(nèi)比較實(shí)驗(yàn)組腎組織AQP-1表達(dá)在3h前無(wú)明顯變化（P＞0.05），但6h后表達(dá)明顯減少（P＜0.05）；MMP-9表達(dá)自3h開(kāi)始呈逐漸增加趨勢(shì)（P＜0.05）。與對(duì)照組相比較各時(shí)間點(diǎn)AQP-1逐漸減少，MMP-9逐漸增加（P＜0.05）。
　　3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組間各時(shí)間點(diǎn)AQP

6、-1mRNA及MMP-9mRNA的表達(dá)均無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）實(shí)驗(yàn)組組內(nèi)比較，實(shí)驗(yàn)組腎組織AQP-1mRNA的表達(dá)在3h前無(wú)明顯變化（P＞0.05），但6h后表達(dá)明顯下降（P＜0.05）；MMP-9mRNA的表達(dá)水平自3h開(kāi)始逐漸升高，在12h時(shí)達(dá)到峰值，然后逐漸下降（P＜0.05）。與對(duì)照組組比較，AQP-1mRNA的表達(dá)降低，MMP-9mRNA的表達(dá)升高（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.大鼠靜

7、脈注射胰蛋白酶可以造成大鼠急性腎損傷。腎損傷發(fā)生時(shí)，血清Cr、BUN、TNF-α、IL-1β明顯升高，并隨時(shí)間增加而破壞逐漸加重，證明炎癥因子在胰蛋白酶所致腎損傷中發(fā)揮重要作用。
　　2.在胰蛋白酶所致腎損傷早期AQP-1蛋白表達(dá)無(wú)明顯變化，表明AQP-1蛋白可能不是導(dǎo)致早期胰蛋白酶所致腎損傷的主要機(jī)制；但在實(shí)驗(yàn)后期階段，AQP-1蛋白表達(dá)逐漸下降，導(dǎo)致腎小球、腎小管毛細(xì)血管及微小血管的內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)水分子跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)效率下降，引起水通透