人乳頭瘤病毒18型類病毒顆粒疫苗研制、中和抗體篩選及冷凍電鏡三維結(jié)構(gòu)重建.pdf

1、高危型人乳頭瘤病毒(HumanPapillomavirus，HPV)病毒感染被認(rèn)為是引起女性宮頸癌的主要原因。流行病學(xué)調(diào)查顯示98％的宮頸癌都是由人乳頭瘤病毒(HPV)感染引起，其中約70％是由HPV16或HPV18引起。因此，開發(fā)一種安全，有效的HPV18疫苗對于預(yù)防宮頸癌具有重大的意義。 首先，本研究構(gòu)建了高效HPV18L1蛋白大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng)。利用該表達(dá)系統(tǒng)，HPV18L1蛋白能夠以可溶性形式表達(dá)，保留了其天然的表位。

2、 其次，本研究還還針對大腸桿菌來源的HPV18L1蛋白建立了一套高效，易于放大的純化工藝，以及類病毒顆粒體外組裝工藝。根據(jù)該工藝所制備的HPV18VLPs疫苗純度達(dá)到98％以上，各項鑒定指標(biāo)均符合藥典要求。且動物實驗顯示，該疫苗具有高度的免疫原性，在實驗動物體能能誘導(dǎo)高滴度的HPV18中和抗體。 本研究在成功制備HPV18VLPs疫苗的基礎(chǔ)上，利用假病毒中和模型，一共鑒定出HPV18中和單抗6株，而后通過阻斷實驗進(jìn)一步確

3、定了優(yōu)勢中和單抗11A9以及3C3。為了進(jìn)一步闡明11A9單抗的中和機制，結(jié)合位點，在本研究對HPV18VLPs進(jìn)行了冷凍電鏡觀測，初步了解HPV18VLPs的結(jié)構(gòu)模式。此外，還進(jìn)一步制備了11A9-HPV18VLPs抗原抗體復(fù)合物以備進(jìn)一步進(jìn)行冷凍電鏡研究。 總之，本研究利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)制備了一種廉價，有效的HPV18VLP疫苗，對HPV18的中和單抗進(jìn)行鑒定，并且對于HPV18優(yōu)勢單抗11A9的中和機制，結(jié)合位點進(jìn)行了初