抗EV71病毒中和抗體的篩選及優(yōu)化研究.pdf

1、手足口病是由腸道病毒引起的傳染病，多發(fā)生于5歲以下兒童，可引起手、足、口腔等部位的皰疹，少數(shù)患兒可引起心肌炎、肺水腫、無菌性腦膜腦炎等并發(fā)癥。引發(fā)手足口病的腸道病毒有20多種（型），柯薩奇病毒A組的16、4、5、9、10型，B組的2、5型，以及EV71病毒，均為手足口病較常見的病原體，其中以柯薩奇病毒A16型(CoxA16)和EV71病毒(EV71)最為常見。
　　EV71是隸屬于小RNA病毒科腸道病毒屬，于1969年首次從加利福

2、尼亞患有中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的嬰兒糞便標(biāo)本中分離出來的，EV71為目前腸病毒群中最晚發(fā)現(xiàn)的病毒，其感染性強(qiáng)且致病率高，手足口病EV71病毒可以侵害神經(jīng)系統(tǒng)，造成一系列的重癥表現(xiàn)。出現(xiàn)神經(jīng)性病毒反應(yīng)。若患者體質(zhì)較弱，可能導(dǎo)致呼吸循環(huán)系統(tǒng)衰竭。被喻為21世紀(jì)的“脊髓灰質(zhì)炎”。該病毒已在世界范圍內(nèi)引起十余次手足口病的暴發(fā)和流行，且死亡病例處于上升趨勢。較為嚴(yán)重的一次是1998年發(fā)生在中國臺灣暴發(fā)的EV71手足口病，共有129000例病例，其中重癥

3、病例就多達(dá)400個(gè)，死亡78例。隨后，在中國山東、北京、上海等多個(gè)省市有人死亡，2009年115525人感染，353人死亡。EV71引起的手足口病對人類健康、尤其嬰兒健康造成巨大威脅，但目前仍無特效抗病毒藥物和商品化疫苗問世，因此，研究EV71的感染過程與致病機(jī)制并開發(fā)抗EV71感染藥物顯得十分必要和緊急。
　　本實(shí)驗(yàn)我們選取從臨床死亡病例中分離得到的EV71-HM003207病毒株作為篩選單抗的目標(biāo)抗原，該病毒株屬于C4亞型，它

4、是目前國內(nèi)EV71感染病例中出現(xiàn)頻率最高的病毒亞型，具有一定的代表意義。實(shí)驗(yàn)中我們首先利用RD細(xì)胞擴(kuò)增并且純化了EV71病毒，得到病毒后，免疫BALB/C小鼠，利用雜交瘤技術(shù)結(jié)合ELISA檢測，篩選獲得了14株強(qiáng)結(jié)合型的單克隆抗體;體外的中和保護(hù)實(shí)驗(yàn)證實(shí):12B6、2B6、1G6、2G12、6G5分泌的抗體能夠有效保護(hù)RD細(xì)胞不受EV71病毒侵染，12B6、6G5、2B6、2G12、7G6、7E6分泌的抗體能夠有效保護(hù)SK-N-SH細(xì)胞