草魚MHCⅠ和β2m基因組與二級結(jié)構(gòu)及其單鏈復(fù)合體鑒定病毒表位的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本文對草魚MHCⅠ和β2m基因組與二級結(jié)構(gòu)及其單鏈復(fù)合體鑒定病毒表位進行了研究。文章采用PCR技術(shù)從草魚基因組DNA中克隆了部分Ctid-MHCⅠ基因組序列和2個Ctid-β2m基因組序列。用pMAL-p2X/E.coli表達(dá)系可溶性表達(dá)了Ctid-MHCⅠ和Ctid-β2m融合蛋白。采用圓二色譜(CD)測定了MBP-MHCⅠ、MBP-β2m、MBP蛋白的二級結(jié)構(gòu)(2D)組成；并同源模建了Ctid-MHCⅠ和Ctid-β2m蛋白的三級結(jié)

2、構(gòu)(3D)。隨后，采用SOE-PCR技術(shù)將MHCⅠ-linker-β2m串聯(lián)成基因鏈，再用pMAL-p2X/E.coli表達(dá)系進行可溶性表達(dá)。CD測定了融合MBP-MHCⅠ-linker-β2m蛋白的二級結(jié)構(gòu)組成。在此研究的基礎(chǔ)上，合成了草魚呼腸孤病毒(GCRV)外衣殼蛋白T細(xì)胞表位多肽(GCRV-VP4和GCRV-VP7)，與MHCⅠ-linker-β2m蛋白體外結(jié)合，用酸洗法從MHCⅠ-linker-β2m-peptide復(fù)合物中洗

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