葛根素對(duì)頸上和星狀神經(jīng)節(jié)細(xì)胞P2X-,3-受體介導(dǎo)心肌缺血引發(fā)交感反射的作用研究.pdf

1、背景和目的：心肌缺血可通過(guò)感覺神經(jīng)的傳入信息影響頸部交感神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的功能，進(jìn)而加強(qiáng)交感節(jié)后神經(jīng)元活動(dòng)，引起血壓升高和心率加快等交感興奮性反射。心肌缺血產(chǎn)生ATP與嘌呤能受體在傷害性感覺傳遞中起重要作用。嘌呤能受體中P2X3受體選擇性在傷害性感覺神經(jīng)元高表達(dá)。支配心臟的頸上和星狀神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中有P2X3受體表達(dá)。我們實(shí)驗(yàn)室的研究顯示ATP通過(guò)激活心臟傳入神經(jīng)通路中的頸上交感神經(jīng)節(jié)(SCG)、星狀交感神經(jīng)節(jié)(SG)細(xì)胞的P2X3受體參與了心肌

2、缺血傷害性信息的傳遞。葛根素為豆科植物葛根中提取的一種異黃酮類化合物，具有擴(kuò)張冠脈和腦血管、降低心肌耗氧量、改善心肌收縮功能、促進(jìn)血液循環(huán)、對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)等作用。我們實(shí)驗(yàn)室前期研究表明葛根素可抑制背根神經(jīng)節(jié)和結(jié)狀神經(jīng)節(jié)細(xì)胞P2X3受體激動(dòng)劑激活的電流，減少或抑制傷害性感覺信息的傳遞。但葛根素對(duì)頸部交感神經(jīng)節(jié)細(xì)胞P2X3受體介導(dǎo)心肌缺血引發(fā)交感反射是否產(chǎn)生作用，目前尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)觀察葛根素處理心肌缺血前后頸上、星

3、狀交感神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的P2X3受體和酪氨酸羥化酶(TH)表達(dá)的變化，探討葛根素對(duì)頸上、星狀交感神經(jīng)節(jié)細(xì)胞P2X3受體介導(dǎo)的心肌缺血傷害性信息引發(fā)交感反射的影響，這將有助于人們進(jìn)一步了解葛根素在心肌缺血治療中的作用及其可能作用靶點(diǎn)，并為其防治冠心病心肌缺血、心肌梗死提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 (1)建立心肌缺血大鼠模型，心電圖、心肌HE染色觀察葛根素對(duì)心肌缺血損傷的作用；
　　 (2)無(wú)創(chuàng)法血壓計(jì)檢測(cè)心肌缺

4、血模型組、葛根素干預(yù)的心肌缺血模型組大鼠的血壓、心率及呼吸變化，并與葛根素對(duì)照組和生理鹽水對(duì)照組比較；
　　 (3)免疫熒光雙標(biāo)觀察各組大鼠SCG、SG細(xì)胞和心肌P2X3和TH共表達(dá)的變化；
　　 (4)免疫組化方法和蛋白印跡技術(shù)了解葛根素對(duì)心肌缺血大鼠SCG細(xì)胞和SG細(xì)胞P2X3受體蛋白表達(dá)的影響；
　　 (5)原位雜交的方法觀察葛根素干預(yù)后SCG細(xì)胞和SG細(xì)胞P2X3受體mRNA表達(dá)的變化。
　　 結(jié)

5、果：
　　 (1)心肌缺血損傷的大鼠模型的心電圖出現(xiàn)病理性Q波，ST段移位。心肌HE染色顯示心肌缺血模型組心肌呈現(xiàn)大面積心肌纖維化和心肌細(xì)胞萎縮現(xiàn)象，葛根素干預(yù)后可以改善心肌缺血大鼠心電圖異常變化和心肌損傷。
　　 (2)心肌缺血模型大鼠收縮壓(73．35±2．51mmHg)，心率(445．67±16．58次/分)和呼吸(92．33±5．78次/分)與對(duì)照組大鼠收縮壓(69．13±0．55mmHg)、心率(366．17±

6、8．44次/分)和呼吸(72．83±2．63次/分)相比增加(n=6)(p<0．05)。葛根素干預(yù)組大鼠收縮壓(69．85±1．61 mmHg)、心率(374．00±6．89次/分)和呼吸(76．33±2．16次/分)較心肌缺血組大鼠降低(n=6)(p<0．05)。對(duì)照組和葛根素干預(yù)組無(wú)顯著性差異(p>0．05)。
　　 (3)免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果顯示在大鼠頸上、星狀交感神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和心肌組織P2X3受體和TH共表達(dá)，心肌缺血組高于對(duì)

7、照組，葛根素干預(yù)心肌缺血后，共表達(dá)下降。
　　 (4)免疫組化結(jié)果顯示頸上神經(jīng)節(jié)P2X3受體表達(dá)的光密度值在生理鹽水對(duì)照組，葛根素對(duì)照組，心肌缺血組，葛根素干預(yù)組分別為0．10±0．03(n=10)，0．08±0．01(n=10)，0．15±0．03(n=10)，0．07±0．04(n=10)。心肌缺血組P2X3受體表達(dá)高于對(duì)照組和葛根素干預(yù)組(p<0．01；F(3，36)=11．285)，心肌缺血組P2X3蛋白表達(dá)較對(duì)照組增加

8、(p<0．05)，葛根素干預(yù)的心肌缺血組的P2X3蛋白表達(dá)較心肌缺血組減少(p<0．05)；對(duì)照組和葛根素干預(yù)組無(wú)顯著性差異(p>0．05；F(2，27)=1．292)。星狀神經(jīng)節(jié)P2X3受體表達(dá)的光密度值在生理鹽水對(duì)照組，葛根素對(duì)照組，心肌缺血組，葛根素干預(yù)組分別為0．16±0．02(n=10)，0．15±0．01(n=10)，0．20±0．02(n=10)，0．15±0．01(n=10)。心肌缺血組P2X3受體表達(dá)高于對(duì)照組和葛根素

9、干預(yù)組(p<0．01；F(3，36)=9．544)，心肌缺血組P2X3蛋白表達(dá)較對(duì)照組增加(p<0．05)，葛根素干預(yù)的心肌缺血組的P2X3蛋白表達(dá)較心肌缺血組減少(p<0．05)；對(duì)照組和葛根素干預(yù)組無(wú)顯著性差異(p>0．05；F(2，27)=0．895)。
　　 (5)原位雜交結(jié)果顯示頸上神經(jīng)節(jié)P2X3 mRNA表達(dá)的光密度值在生理鹽水對(duì)照組，葛根素對(duì)照組，心肌缺血組，葛根素干預(yù)組分別為0．13±0．02(n=10)，0．1

10、2±0．01(n=10)，0．23±0．03(n=10)，0．12±0．01(n=10)。心肌缺血組P2X3 mRNA表達(dá)高于對(duì)照組和葛根素干預(yù)組(p<0．01；F(3，36)=42．589)，心肌缺血組P2X3 mRNA表達(dá)較對(duì)照組增加(p<0．05)，葛根素干預(yù)的心肌缺血組的P2X3 mRNA表達(dá)較心肌缺血組減少(p<0．05)；對(duì)照組和葛根素干預(yù)組無(wú)顯著性差異(p>0．05；F(2，27)=1．253)。星狀神經(jīng)節(jié)P2X3 mRN

11、A表達(dá)的光密度值在生理鹽水對(duì)照組，葛根素對(duì)照組，心肌缺血組，葛根素干預(yù)組分別為0．08±0．01(n=10)，0．09±0．01(n=10)，0．12±0．02(n=10)，0．09±0．02(n=10)。心肌缺血組P2X3 mRNA表達(dá)高于對(duì)照組和葛根素干預(yù)組(p<0．01；F(3，36)=11．345)，心肌缺血組P2X3 mRNA表達(dá)較對(duì)照組增加(p<0．05)，葛根素干預(yù)的心肌缺血組P2X3 mRNA表達(dá)較心肌缺血組減少(p<0

12、．05)；對(duì)照組和葛根素干預(yù)組無(wú)顯著性差異(p>0．05；F(2，27)=0．906)。
　　 (6)蛋白印跡結(jié)果經(jīng)β-actin標(biāo)化后顯示在SCG細(xì)胞P2X3受體表達(dá)的光密度值在生理鹽水對(duì)照組，葛根素對(duì)照組，心肌缺血組，葛根素干預(yù)組分別為0．97±0．02(n=10)，0．98±0．04(n=10)，1．15±0．04(n=10)，0．99±0．03(n=10)。心肌缺血組P2X3受體表達(dá)高于對(duì)照組和葛根素干預(yù)組(p<0．01

13、；F(3，36)=52．418)，心肌缺血組P2X3蛋白表達(dá)較對(duì)照組增加(p<0．05)，葛根素干預(yù)的心肌缺血組P2X3蛋白表達(dá)較心肌缺血組減少(p<0．05)；對(duì)照組和葛根素干預(yù)組無(wú)顯著性差異(p>0．05；F(2，27)=0．552)。在SG細(xì)胞P2X3受體表達(dá)的光密度值在生理鹽水對(duì)照組，葛根素對(duì)照組，心肌缺血組，葛根素干預(yù)組分別為0．99±0．02(n=10)，0．98±0．02(n=10)，1．11±0．05(n=10)，0．9

14、9±0．03(n=10)。心肌缺血組P2X3受體表達(dá)高于對(duì)照組和葛根素干預(yù)組(P<0．01；F(3，36)=26．192)，心肌缺血組P2X3蛋白表達(dá)較對(duì)照組增加(p<0．05)，葛根素干預(yù)的心肌缺血組的P2X3蛋白表達(dá)較心肌缺血組減少(p<0．05)；對(duì)照組和葛根素干預(yù)組無(wú)顯著性差異(p>0．05；F(2，27)=1．043)。
　　 結(jié)論：葛根素可以降低心肌缺血大鼠SCG和SG神經(jīng)細(xì)胞及心肌交感神經(jīng)P2X3受體表達(dá)，從而使心